Thioflavin T (Basic Yellow 1)
(Synonyms: 硫黄素T; Basic Yellow 1) 目录号 : GC30031
A fluorescent probe for amyloid fibrils
Cas No.:2390-54-7
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00%
- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1.制备染色液
(1)将Thioflavin T溶解于70%乙醇中以产生5 mM储存液；
注意：储存液建议使用0.22μm滤膜过滤除菌，按照单次用量分装后于-4℃或-20℃避光保存，避免反复冻融。
(2)将储存液在培养基或其他缓冲液中进一步稀释至最终浓度为5μM的工作液。
注意: 请根据实际情况调整工作液浓度，现用现配。
2.细胞染色
(1)在无菌盖玻片上培养贴壁细胞；
(2)从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中；
(3)使用合适的缓冲液清洗盖玻片2-3次；
(4)在4%多聚甲醛中固定细胞，室温固定5-20min，固定完成后用合适的缓冲液清洗盖玻片2-3次；
(5)使用含0.1%Triton X的PBS透化细胞10-15min，通透结束后用合适的缓冲液清洗盖玻片2-3次；
(6)从盖玻片的一角加入约100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞，37 °C避光孵育5-30分钟；
注意：不同实验最佳孵育时间不同，请根据具体实验需求自行摸索。
(7)孵育结束后吸弃染料工作液，使用合适的缓冲液清洗盖玻片2~3次。
3.显微镜检测：Thioflavin T结合淀粉样纤维后的最大激发波长和发射波长分别为450/482nm。
注意事项：
① 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭；
② 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1]. H LeVine 3rd. Thioflavine T interaction with synthetic Alzheimer's disease beta-amyloid peptides: detection of amyloid aggregation in solution. 1993 Mar;2(3):404-10. doi: 10.1002/pro.5560020312.
[2]. Daniel R Beriault, Geoff H Werstuck. Detection and quantification of endoplasmic reticulum stress in living cells using the fluorescent compound, Thioflavin T. 2013 Oct;1833(10):2293-301. doi: 10.1016/j.bbamcr.2013.05.020. Epub 2013 Jun 5.
Thioflavin T is a fluorescent probe for amyloid fibrils.1 It displays excitation/emission maxima of 385/445 nm, respectively, and exhibits an increase in fluorescence intensity and a shift in excitation/emission maxima to 450/482 nm upon binding to amyloid fibrils.1,2 The fluorescence intensity is also pH dependent, increasing in intensity as the pH increases.2 Thioflavin T binds to different types of amyloid fibrils with varying affinity, over two orders of magnitude, depending on type and binding mode.3 It has been used with fluorescence microscopy to visualize brain amyloid fibril plaques in a rat model of Alzheimer's disease.4
1.Biancalana, M., and Koide, S.Molecular mechanism of Thioflavin-T binding to amyloid fibrilsBiochim. Biophys. Acta1804(7)1405-1412(2010) 2.Naiki, H., Higuchi, K., Hosokawa, M., et al.Fluorometric determination of amyloid fibrils in vitro using the fluorescent dye, thioflavin TAnal. Biochem.177(2)244-249(1989) 3.Sulatskaya, A.I., Kuznetsova, I.M., Belousov, M.V., et al.Stoichiometry and affinity of thioflavin T binding to Sup35p amyloid fibrilsPLoS One11(5)e0156314(2016) 4.Alimohammadi-Kamalabadi, M., Eshraghian, M., Zarindast, M.-R., et al.Effect of creatine supplementation on cognitive performance and apoptosis in a rat model of amyloid-beta-induced Alzheimer's diseaseIran J. Basic Med. Sci.19(11)1159-1165(2016)
| Cas No. | 2390-54-7 | SDF | |
| 别名 | 硫黄素T; Basic Yellow 1 | ||
| Canonical SMILES | CC1=CC=C2[N+](C)=C(C3=CC=C(N(C)C)C=C3)SC2=C1.[Cl-] | ||
| 分子式 | C17H19ClN2S | 分子量 | 318.86 |
| 溶解度 | DMSO : 22.5 mg/mL (70.56 mM);Water : 12.5 mg/mL (39.20 mM) | 储存条件 | Store at RT, protect from light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 3.1362 mL | 15.6809 mL | 31.3617 mL |
| 5 mM | 0.6272 mL | 3.1362 mL | 6.2723 mL |
| 10 mM | 0.3136 mL | 1.5681 mL | 3.1362 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。