Ac-PAL-AMC
(Synonyms: Acetyl-Pro-Ala-Leu-7-amino-4-Methylcoumarin, Ac-Pro-Ala-Leu-AMC) 目录号 : GC42710Ac-PAL-AMC是一种荧光底物，是20S蛋白酶体LMP2/β1i亚基的特异性荧光底物，荧光团7-amino-4-methylcoumarin（AMC）的最大激发/发射波长为380nm/460nm。
Cas No.:1431362-79-6
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Ac-PAL-AMC is a fluorescent substrate that is specific to the 20S proteasome LMP2/β1i subunit. The maximum excitation/emission wavelength of the fluorophore 7-amino-4-methylcoumarin (AMC) is 380nm/460nm[1, 2, 3].
References:
[1] Erokhov P A, Kulikov A M, Karpova Y D, et al. Proteasomes in Patient Rectal Cancer and Different Intestine Locations: Where Does Proteasome Pool Change?. Cancers 2021, 13, 1108[EB/OL].(2021)
[2] Obayashi Y, Suzuki S. Proteolytic enzymes in coastal surface seawater: significant activity of endopeptidases and exopeptidases[J]. Limnology and oceanography, 2005, 50(2): 722-726.
[3] Schulze A, Wermann M, Demuth H U, et al. Continuous assays for meprin alpha and beta using prolyl tripeptidyl aminopeptidase (PtP) from Porphyromonas gingivalis[J]. Analytical biochemistry, 2018, 559: 11-16.
Ac-PAL-AMC是一种荧光底物，是20S蛋白酶体LMP2/β1i亚基的特异性荧光底物，荧光团7-amino-4-methylcoumarin（AMC）的最大激发/发射波长为380nm/460nm[1, 2, 3]。
本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1. 溶液配制
（1）储存液：用DMSO溶解Ac-PAL-AMC，配制10mM母液。
注意：未使用的储存液分装后在-20℃或-80°C避光保存，避免反复冻融。
（2）工作液：用实验缓冲液稀释母液到所需的工作浓度，例如：100μM[1]。
注意：最佳的工作浓度请根据实际情况调整或参阅文献自行设置梯度浓度进行摸索。工作液必须现配现用。
2. 采用Ac-PAL-AMC测定20S蛋白酶体活性[1](来自文献,仅做参考)
（1）在96孔板中加入20S蛋白酶体（0.5μg/mL）与蛋白酶体抑制剂，在反应缓冲液（20mM Tris-HCl，0.5mM EDTA，0.035% SDS）中混合，室温下孵育30min。
（2）孵育完成后，加入Ac-PAL-AMC荧光底物，最终工作浓度为100μM，将反应体系的最终体积调整至100μL。
（3）使用荧光酶标仪（激发波长360nm，发射波长460nm）检测荧光强度。记录荧光值变化，计算酶活性。
References:
[1] Yeo I J, Lee M J, Baek A, et al. A dual inhibitor of the proteasome catalytic subunits LMP2 and Y attenuates disease progression in mouse models of Alzheimer’s disease[J]. Scientific reports, 2019, 9(1): 18393.
| Cas No. | 1431362-79-6 | SDF | |
| 别名 | Acetyl-Pro-Ala-Leu-7-amino-4-Methylcoumarin, Ac-Pro-Ala-Leu-AMC | ||
| Canonical SMILES | CC(C1=CC=C(NC([C@H](CC(C)C)NC([C@H](C)NC([C@@H]2CCCN2C(C)=O)=O)=O)=O)C=C1O3)=CC3=O | ||
| 分子式 | C26H34N4O6 | 分子量 | 498.6 |
| 溶解度 | DMSO : 100 mg/mL (200.57 mM; Need ultrasonic) | 储存条件 | Store at -20°C, protect from light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.0056 mL | 10.0281 mL | 20.0562 mL |
| 5 mM | 401.1 μL | 2.0056 mL | 4.0112 mL |
| 10 mM | 200.6 μL | 1.0028 mL | 2.0056 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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- Purity: >95.00%
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- SDS (Safety Data Sheet)
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