p-Nitrophenylphosphorylcholine
(Synonyms: O-(对硝基苯基磷酰)胆碱) 目录号 : GC44664
p-Nitrophenylphosphorylcholine是一种合成的显色底物，常用于比色检测磷脂酶C及相关的磷酸二酯酶的活性。
Cas No.:21064-69-7
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
_1-3.$$$39978408@51.jpg');)
_1-9.$$$38538795@65.jpg');)
_1-9.$$$39112701@51.jpg');)
_1-7.$$$37316672@70.jpg');)
_366-372.$$$36198801@70.jpg');)
.$$$38565142@65.jpg');)
_1867-1883.$$$33248023@67.jpg');)
_eads6055.$$$39977546@45.jpg');)
_eadm9805.$$$40080571@45.jpg');)
_eadj3020.$$$39666821@45.jpg');)
_1-20.$$$39757301@28.jpg');)
_1-24.$$$38898113@28.jpg');)
_273-287.$$$36806353@46.jpg');)
_1-16.$$$37156877@44.jpg');)
_1-19.$$$37460805@44.jpg');)
_1291-1307.$$$34518654@46.jpg');)
p-Nitrophenylphosphorylcholine is a synthetic chromogenic substrate commonly used in colorimetric detection of phospholipase C and related phosphodiesterase activities [1]. Under alkaline or neutral buffer conditions, p-Nitrophenylphosphorylcholine is hydrolyzed by the enzyme to release yellow p-nitrophenol (pNP), which has a characteristic absorption peak near 405nm, facilitating quantitative monitoring of enzyme activity by UV-Vis spectroscopy [2-3].
References:
[1]. Berka R M, Gray G L, Vasil M L. Studies of phospholipase C (heat-labile hemolysin) in Pseudomonas aeruginosa[J]. Infection and Immunity, 1981, 34(3): 1071-1074.
[2]. Martin L M. Facile reduction in the synthesis of phosphorylcholine affinity columns[J]. Tetrahedron letters, 1996, 37(44): 7921-7924.
[3]. Flieger A, Gong S, Faigle M, et al. Critical evaluation of p-nitrophenylphosphorylcholine (p-NPPC) as artificial substrate for the detection of phospholipase C[J]. Enzyme and microbial technology, 2000, 26(5-6): 451-458.
p-Nitrophenylphosphorylcholine是一种合成的显色底物，常用于比色检测磷脂酶C及相关的磷酸二酯酶的活性 [1]。在碱性或中性缓冲条件下，p-Nitrophenylphosphorylcholine被酶水解，释放出黄色的对硝基苯酚（pNP），其在405nm附近具有特征吸收峰，便于通过紫外可见光谱法定量监测酶活性 [2-3]。
本方案描述了使用对p-Nitrophenylphosphorylcholine水解作为分光光度法定量测定纯化酶、重组蛋白或细胞/组织提取物中磷脂酶C（PLC）或相关磷酸二酯酶活性的方法。实验条件可能需要根据酶来源、缓冲液组成和实验设计进行优化 [1-2]。
1. 试剂和材料准备
p-Nitrophenylphosphorylcholine，磷脂酶C酶，实验缓冲液：50mM Tris-HCl (pH 7.4)，0.1% Triton X-100，5mM CaCl₂，用于校准的对硝基苯酚（pNP）标准溶液。
2. 实验步骤
（1）酶孵育设置
制备反应混合物（总体积：每次反应200µL）：p-Nitrophenylphosphorylcholine（终浓度：1-5mM）。酶样品（例如，纯化蛋白浓度为0.1-0.5µg/µL，或等量粗提物）。加检测缓冲液至终体积。
（2）预孵育
将反应混合物（不含底物）在37℃预热5分钟。
（3）反应启动
向混合物中加入p-Nitrophenylphosphorylcholine或酶启动反应。在37℃孵育30分钟。
（4）反应终止
向每个反应管中加入等体积（200µL）终止液（1M Tris，pH 10）终止反应。
（5）样品处理
如有沉淀，以13,000rpm离心5分钟。收集上清液进行分析。
（6）检测与定量
使用酶标仪或分光光度计测量上清液在405nm处的吸光度。
使用终止液中对硝基苯酚的梯度稀释液绘制标准曲线。定量释放的pNP量，并计算酶活性。
注意事项
（1）为获得准确的结果，请始终新鲜配制p-Nitrophenylphosphorylcholine和pNP标准品。
（2）根据目标酶优化pH值、缓冲液成分和金属离子。
（3）包括阴性对照（无酶或热灭活酶），并尽可能包括阳性对照（特征明确的PLC或参考标准品）。
（4）终止反应后，将样品置于冰上保存，如不立即测量，则储存于-80℃。
References:
[1]. Flieger A, Gong S, Faigle M, et al. Critical evaluation of p-nitrophenylphosphorylcholine (p-NPPC) as artificial substrate for the detection of phospholipase C[J]. Enzyme and microbial technology, 2000, 26(5-6): 451-458.
[2]. Zyla K, Gogol D. In vitro efficacies of phosphorolytic enzymes synthesized in mycelial cells of Aspergillus niger AbZ4 grown by a liquid surface fermentation[J]. Journal of agricultural and food chemistry, 2002, 50(4): 899-905.
| Cas No. | 21064-69-7 | SDF | |
| 别名 | O-(对硝基苯基磷酰)胆碱 | ||
| Canonical SMILES | C[N+](C)(C)CCOP(OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1)([O-])=O | ||
| 分子式 | C11H17N2O6P | 分子量 | 304.2 |
| 溶解度 | DMF: 1 mg/ml,DMSO: 10 mg/ml,Ethanol: 10 mg/ml,PBS (pH 7.2): 10 mg/ml | 储存条件 | Store at -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 3.2873 mL | 16.4366 mL | 32.8731 mL |
| 5 mM | 0.6575 mL | 3.2873 mL | 6.5746 mL |
| 10 mM | 0.3287 mL | 1.6437 mL | 3.2873 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >99.50%
- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet