O-Propargyl-Puromycin (O-Propargylpuromycin)
(Synonyms: OP-puro) 目录号 : GC30010O-Propargyl-Puromycin (O-Propargylpuromycin)是通过将嘌呤霉素的O-甲基苯基环替换为炔基(alkyne)而合成的衍生物。
Cas No.:1416561-90-4
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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O-Propargyl-Puromycin (O-Propargylpuromycin) is a derivative synthesized by replacing the O-methyl-phenyl ring of puromycin with an alkyne group. O-Propargyl-Puromycin allows subsequent manipulation of puromycylated proteins by copper-catalyzed alkyne-azide cycloaddition of a ‘clickable’ biotin or fluorophore[1].
References:
[1] Aviner R. The science of puromycin: From studies of ribosome function to applications in biotechnology. Comput Struct Biotechnol J. 2020 Apr 24;18:1074-1083.
O-Propargyl-Puromycin (O-Propargylpuromycin)是通过将嘌呤霉素的O-甲基苯基环替换为炔基(alkyne)而合成的衍生物。O-Propargyl-Puromycin可通过铜催化的炔-叠氮环加成反应对嘌呤霉素化的蛋白质进行后续操作，例如连接“可点击”的生物素或荧光团[1]。
O-Propargyl-Puromycin标记蛋白的拉下实验[1]
本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1、A375细胞用含有30µM O-Propargyl-Puromycin的新鲜培养基孵育3小时。
2、用预冷PBS洗涤细胞，并用含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞。
3、使用Click-&-Go®蛋白反应缓冲液试剂盒，按照制造商的说明，通过点击化学反应将O-Propargyl-Puromycin标记的蛋白与生物素化的叠氮基团(Click Chemistry Tools)连接。
4、加入5倍体积的预冷丙酮，将生物素连接的蛋白样品在-20°C下沉淀过夜。
5、离心收集沉淀的蛋白，并用预冷甲醇洗涤两次。将500μg沉淀的蛋白重新悬浮于含有1% SDS的RIPA缓冲液中，并与链霉亲和素磁珠在4°C下孵育过夜，期间不断旋转。
6、第二天，用冷NETN缓冲液(20mM Tris-Cl, pH 8.0, 0.5% Nonidet P-40, 100mM氯化钠, 1mM EDTA)洗涤样品3次，链霉亲和素磁珠结合的蛋白通过SDS‒PAGE进行分析。
References:
[1] Park BS, Jeon H, Kim Y, Kwon H, Choi GE, Chi SG, Park HM, Lee H, Kim T. Polyamine and EIF5A hypusination downstream of c-Myc confers targeted therapy resistance in BRAF mutant melanoma. Mol Cancer. 2024 Jul 4;23(1):136.
| Cas No. | 1416561-90-4 | SDF | |
| 别名 | OP-puro | ||
| 化学名 | 3'-[[(2S)-2-amino-1-oxo-3-[4-(2-propyn-1-yloxy)phenyl]propyl]amino]-3'-deoxy-N,N-dimethyl-adenosine | ||
| Canonical SMILES | CN(C)C1=C2C(N([C@H]3[C@H](O)[C@H](NC([C@@H](N)CC4=CC=C(OCC#C)C=C4)=O)[C@@H](CO)O3)C=N2)=NC=N1 | ||
| 分子式 | C24H29N7O5 | 分子量 | 495.53 |
| 溶解度 | DMSO : ≥ 31 mg/mL (62.56 mM) | 储存条件 | Store at -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.018 mL | 10.0902 mL | 20.1804 mL |
| 5 mM | 0.4036 mL | 2.018 mL | 4.0361 mL |
| 10 mM | 0.2018 mL | 1.009 mL | 2.018 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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