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Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 目录号 GK10001

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规格 价格 库存 购买数量
1x5mL (500 tests)
¥240.00
现货
2x5mL (1000 tests)
¥400.00
现货
6x5mL (3000 tests)
¥1,128.00
现货
10x5mL (5000 tests)
¥1,760.00
现货
20x5mL (10000 tests)
¥2,880.00
现货

Customer Review

Based on customer reviews.

电话:400-920-5774 Email: sales@glpbio.cn

Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.

纯度 & 产品资料

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质量管理

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CCK-8

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CCK-8

实验参考方法

细胞数量确定
1.将细胞悬浮液(100μL/孔)接种在96洞孔板中。将板在潮湿的培养箱中预孵育(例如,在37℃,5%CO2下)。
2.向板的每个孔中加入10μLCCK8溶液。注意不要在孔洞中引入气泡,因为它们会干扰O.D.读数。
3.将培养板在培养箱中孵育1-4小时。
4.使用酶标仪测量450 nm处的吸光度。

细胞增殖和细胞毒性测定
1.将种子细胞以103-104个细胞/孔的密度在96孔板中在100μL培养基中培养,含有或不含有待测化合物。将细胞在CO2培养箱中于37℃培养24小时。
2.将10μL不同浓度的待测物质加入板中。
3.将培养板在培养箱中孵育适当的时间(例如,6,12,24或48小时)。
4.使用重复移液器向板的每个孔中加入10μLCCK8溶液。注意不要在孔洞中引入气泡,因为它们会干扰O.D.读数。
5.将培养板在培养箱中孵育1-4小时。
6.在读取印版之前,重要的是在轨道振动器上轻轻混合1分钟,以确保颜色均匀分布。
7.使用酶标仪测量450 nm处的吸光度。

数据分析
统计分析有几种方法,您可以选择使用O.D.值或细胞数量,我们提供其中一种方法。
细胞存活率(%)= [(As-Ab)/(Ac-Ab)]×100
抑制率(%)= [(Ac-As)/(Ac-Ab)]×100
As =实验孔吸光度(含有细胞,培养基,CCK-8和待测化合物的孔的吸光度)。
Ab =空白孔吸光度(含有培养基和CCK-8的孔的吸光度)。
Ac =对照孔吸光度(含有细胞,培养基和CCK-8的孔的吸光度)。

制作标准曲线
1. 细胞计数板计数细胞悬液中的细胞数。
2. 使用培养基,等比稀释细胞悬液为一个浓度梯度,通常需要5-7个浓度梯度,每组几个复孔。然后接种细胞。(注意每孔的细胞数量。如果您将细胞悬液稀释在管中,在加入培养板的孔之前,请小心再次混匀细胞。每孔中细胞悬液的体积应该是一致的。)
3. 培养直至细胞贴壁(通常2-4小时),然后每100 μl培养基加入10 μl CCK-8。继续孵育1-4小时,用酶标仪测量450nm处的吸光度。制作出一条以细胞数为X轴坐标,O.D.值为Y轴坐标的标准曲线。
可以基于该曲线确定待测样品的细胞数。使用此标准曲线的先决条件是培养检测条件相同。

注意事项
1. 确保药物和CCK8均匀分布在培养基中。
2. 细胞增殖越多, 颜色越深; 细胞毒性越强,颜色越浅。
3. 对于贴壁细胞,每孔至少需要1000个细胞(100 μl培养基)。对于白细胞,由于灵敏度较低,每孔至少需要2500个细胞(100 μl培养基)。推荐的96孔板每孔最大细胞数为25000。如果使用24孔或6孔板进行该检测,请计算相应的每孔的细胞数,并调整CCK-8的体积,使其为每孔总液体体积的10%。
4. 因为CCK8测定是基于活细胞中的脱氢酶活性,影响脱氢酶活性的条件或化学物质可能导致实际活细胞数与使用CCK-8测定活细胞数之间有差异。
5. WST-8可能与还原剂反应生成WST-8 formazan。如果使用还原剂 (例如一些抗氧化剂)会干扰检测。如果待检测体系中存在较多的还原剂,需设法去除。
6. 孵育2小时后,背景O.D.值一般为0.1-0.2单位。
7. 注意不要在孔中引入气泡,因为它们会干扰O.D.值。
8. 如果您想对CCK8溶液进行灭菌,请使用0.2 μm的膜过滤溶液。
9. 孵育时间因孔中细胞的类型和数量而异。通常,白细胞着色较弱,因此可能需要较长的孵育时间(长达4小时)或大量细胞(~105细胞/孔)。
10. 如果细胞悬液中存在高浊度, 测量并减去样品在600nm或更高波长的O.D值。
11. CCK8不能用于细胞染色。
12. 培养基中的酚红不会影响实验结果,酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。
13. CCK8的毒性非常低,在CCK8测定完成后,相同的细胞可用于其他细胞增殖测定,例如结晶紫测定,中性红测定或DNA荧光测定。(除非细胞极为稀少,不推荐。)
14. 该试剂盒可用于大肠杆菌,但不能用于酵母细胞。
15. 在读取平板之前,您可以在摇床上轻柔混匀。
16. 我们建议将细胞接种在靠近培养板中央的孔中,最外围一圈孔中的培养基容易蒸发,可以用PBS,水或培养基填充这些孔。
17. 如果您没有450nm滤光片。您也可以使用吸光度在430和490nm之间的滤光片, 450nm滤光片具有最佳灵敏度。
18. 测量450nm处的吸光度,如果您需要进行双波长测定,作为参考波长可以测定650nm处的吸光度。
19. 药物中金属离子的存在可能会影响CCK8的灵敏度。终浓度为1mM的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制 5%、15%、 90% 的显色反应,使灵敏度降低。如果终浓度是10mM的话,将会100%抑制。

功能属性

应用
1) 细胞增殖测定 - GlpBio细胞计数试剂盒-8(CCK-8)是水溶性的,在培养中是稳定的,并且是无毒的。
2) 细胞活力测定 - 代谢活性和染料产生与改变的活力成比例地变化。
3) 细胞因子测定 - 测量细胞因子诱导的增殖。如果需要,可以在研究结束时回收细胞并扩增。
4) 细胞毒性测定 - 来自细胞毒性化学物质的细胞死亡对颜色发展没有影响,只有活细胞将试剂转化为比色指示剂。试剂本身具有可忽略的毒性,并且通常对细胞是安全的。
运输方式蓝冰运输。
储存条件储存在4°C避光,可稳定长达12个月。储存在-20°C避光,可稳定长达2年。
用途仅供研究使用!不能用于人体。

产品优势

Comparison of Different Methods to Measure Cell Viability
CCK-8 MTT MTS SRB
Solubility Water soluble Indissolvable Water soluble Indissolvable
Detection Wavelength 450nm 490nm 450nm 510nm
Character Liquid Solid Liquid Liquid
Usage No need to prepare Prepare the solutions Use it right after it was ready Prepared beforehand
Need to redissolve or not NO Yes,by DMSO No Yes,by Tris-base solution
Convenience +++ ++ +++ +
Detection speed +++ + ++ +
Repeatability +++ + ++ ++
Stability ++ + + +++

产品描述

细胞计数试剂盒-8(CCK-8)允许使用WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺基苯基)-2H-)进行方便的分析四唑盐,一钠盐),其在电子载体1-甲氧基PMS存在下生物还原时产生水溶性甲dye染料。将CCK-8溶液直接添加到细胞中,不需要预先混合组分。 WST-8被细胞脱氢酶生物还原为可溶于组织培养基的橙色甲产物。产生的甲的量与活细胞的数量成正比。由于CCK-8溶液非常稳定并且几乎没有细胞毒性,因此可以进行更长的孵育,例如24至48小时。
细胞计数试剂盒-8允许灵敏的比色测定法测定增殖和细胞毒性测定中活细胞的数量。检测灵敏度高于任何其他四唑盐,如MTT,XTT或MTS。

CCK-8

图1: Cell Counting Kit-8 (CCK-8)的工作机制.