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BCA Protein Assay Kit (BCA蛋白浓度测定试剂盒) 目录号 GK10009

Bicinchoninic Acid Kit for Protein Determination

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500T
¥280.00
现货
2500T
¥800.00
现货

Customer Review

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Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.

文献引用

实验参考方法

A.试管配制

1.以50:1的比例混合BCA试剂A和BCA试剂B. 即将50 ml BCA试剂A与1 ml BCA试剂B混合.
注意: 使用以下公式确定所需工作试剂的总量.  (标准品+待测样品) x (重复次数) x (每个样品所需要的BCA工作液) =所需BCA工作液总体积.
2.按照表1配制新的标准品体系. (用0.9% NaCl或PBS稀释白蛋白 (BSA) 标准液)

表1:白蛋白(BSA)标准品的制备

  Tube Number     稀释液体积 (μl)   BSA体积 (μl)   BSA终浓度 (μg/ml)  
A 0 μl   900 μl of 2 mg/ml Stock   2000 μg/ml
B 100 μl 300 μl of tube A 1500 μg/ml
C 300 μl 300 μl of tube A 1000 μg/ml
D 200 μl 200 μl of tube B 750 μg/ml
E 300 μl 300 μl of tube C 500 μg/ml
F 300 μl 300 μl of tube E 250 μg/ml
G 300 μl 300 μl of tube F 125 μg/ml
H 400 μl 100 μl of tube G 25 μg/ml
I 300 μl 0 0 (blank)

3.将0.1 ml的每种标准品和蛋白质样品加入单独的标记试管中.
4.在每个试管中加入2 ml BCA工作试剂并充分混合.
5.在37°C下孵育30分钟.
注意:增加孵育时间和温度会增加每次测试的净562 nm吸光度, 并同时降低试剂盒的最低检测水平和测试范围.
6.将所有管子冷却到室温(RT) .
7.将分光光度计的波长设置为OD 562nm. 用水将仪器校准为零. 随后, 在10分钟内测量所有样品的吸光度.
注意: 即使冷却至室温后, 色彩仍会继续显影. 但是, 如果所有吸光度测量均在10分钟内进行, 则随后在RT处的显影太弱而不会产生明显的误差.
8.从所有读数中减去空白的OD562.
9.绘制BSA标准曲线: OD562 (Y轴) vs BSA标准浓度 (X轴)。 使用标准曲线确定每个待测样品的蛋白质浓度.

B. 微孔检测法

1.以50:1的比例混合BCA试剂A和BCA试剂B. 即将50 ml BCA试剂A与1 ml BCA试剂B混合.
注意: 使用以下公式确定所需工作试剂的总量. (标准品+待测样品) x (重复次数) x (每个样品所需要的BCA工作液) =所需BCA工作液总体积.
2.按照表2配制新的标准品体系. (用0.9% NaCl或PBS稀释白蛋白 (BSA) 标准液)

表2:白蛋白(BSA)标准品的制备

 Tube Number    稀释液体积(μl)   BSA体积 (μl)   BSA终浓度 (μg/ml)  
A 0 μl   200 μl of 2 mg/ml Stock   2000 μg/ml
B 30 μl 90 μl of tube A 1500 μg/ml
C 60 μl 60 μl of tube A 1000 μg/ml
D 60 μl 60 μl of tube B 750 μg/ml
E 60 μl 60 μl of tube C 500 μg/ml
F 60 μl 60 μl of tube E 250 μg/ml
G 60 μl 60 μl of tube F 125 μg/ml
H 100 μl 25 μl of tube G 25 μg/ml
I 60 μl 0 0 (blank)

3.将25μl的每种标准品和蛋白质样品添加到单独的微孔板孔中。
4.向每个孔中添加200μlBCA工作试剂并混合。
5.密封板并在37°C下孵育30分钟。
6.将板冷却至室温(RT).
7.在10分钟内在读板器上测量562 nm的吸光度.
8.从所有读数中减去空白的OD562.  绘制BSA标准曲线: OD562 (在Y轴上) 对BSA标准浓度 (在X轴上). 使用标准曲线确定每个待测样品的蛋白质浓度.

重要产品信息

1.如果将本试剂盒冷藏或存放在冷库中, 则试剂A或试剂B中可能会形成沉淀物. 要溶解沉淀物, 请在37°C下缓慢加热溶液, 同时进行混合或微波处理几秒钟. 如果试剂盒被细菌污染, 则将其丢弃.
2.如果样品中仍然存在还原性物质或金属螯合物而引起干扰, 建议使用Bradford分析试剂盒.
3.建议一式两份地测定不同浓度和样品的标准液. 每种测定均应绘制标准曲线.
4.彻底混合试剂A和试剂B后, 新形成的绿色浊度将消失. 它不会影响性能.
5.使用分光光度计检测蛋白质浓度时, 测定的样品量将减少. 使用37°C的培养箱时, 请防止水蒸发的影响.
6.消除或最小化干扰物质影响的几种方法:
•通过透析或凝胶过滤去除干扰物质.
•稀释样品,直到物质不再干扰为止.
•由于高浓度的去污剂也会影响结果, 因此请用三氯乙酸 (TCA) 沉淀样品中的蛋白质.
7,避免使用包括还原性物质, 螯合剂, 强酸和强碱在内的物质, 因为即使浓度很低也会干扰蛋白质的估算.

产品组成

Components 500 tests 2500 tests 5000 tests
BCA Reagent A 100 mL 500 mL 500 mL × 2
BCA Reagent B 3 mL 5 mL × 3 5 mL × 6
Albumin (BSA) Standards
2mg/mL
1 mL × 2 1 mL × 10 2 mL × 10

功能属性

应用&特点蛋白质印迹
蛋白质表达测定
蛋白质分析和表征
蛋白质定量测定
运输方式蓝冰运输.
储存条件试剂A和B, 室温保存一年有效. 蛋白标准室温保存, 一个月有效; 4°C保存, 一年有效; -20°C可以长期保存.
用途仅供研究使用!不能用于人体。

产品描述

BCA Protein Assay Kit是一种即用型的Western blot相关总蛋白分析试剂, 可通过测量562 nm处的吸光度并与蛋白标准物的吸光度-浓度曲线进行比较, 快速测定总蛋白浓度. 蛋白质定量过程可以在45分钟内完成.
基于BCA (Bicin -choninic   Acid) 法研制而成, 实现了对蛋白质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定. 其原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽链结构能与Cu2+络合生成络合物, 同时将Cu2+还原成Cu+. 该测定法的紫色反应产物是由两个BCA分子与一个亚铜离子螯合形成的. 这种水溶性复合物在562 nm处表现出很强的吸光度, 在较宽的工作范围 (20-2,000μg/ ml) 中, 随着蛋白质浓度的增加, 吸光度几乎呈线性.
BCA方法不是真正的端点方法; 也就是说, 最终颜色会继续变化. 但是, 孵育后, 颜色变化的速度足够慢可以允许分析大量的样品. 据报道, 蛋白质的大分子结构, 肽键的数量以及四种特定氨基酸 (半胱氨酸,胱氨酸,色氨酸和酪氨酸) 的存在与BCA的颜色形成有关. 对二肽, 三肽和四肽的研究表明, 颜色形成的程度不仅仅是由单个产生颜色的官能团的总和引起的.
因此, 通常参考诸如牛血清白蛋白 (BSA) 的常见蛋白质的标准来确定待测蛋白质浓度. 从蛋白质制备一系列已知浓度的稀释液, 并与待测物一起进行测定, 然后根据标准曲线确定每个待测物的浓度. 如果需要精确定量待测蛋白质, 建议选择质量与待测蛋白质相似的蛋白质标准品. 例如, 在测定免疫球蛋白样品时, 可以使用牛γ球蛋白 (BGG) 标准品. 在介绍了两种检测法中, 其中, 试管检测法需要更大体积 (0.1毫升) 的蛋白质样品; 但是, 由于它使用的样品与工作试剂之比为1:20 (v / v), 因此干扰物质的影响降至最低.