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BCA Protein Assay Kit (BCA蛋白浓度测定试剂盒) 目录号 GK10009

Bicinchoninic Acid Kit for Protein Determination

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5mL (500 tests)
¥250.00
现货
25mL (2500 tests)
¥750.00
现货

Customer Review

Based on customer reviews.

电话:400-920-5774 Email: sales@glpbio.cn

Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.

实验参考方法

A.试管配制

1.以50:1的比例混合BCA试剂A和BCA试剂B. 即将50 ml BCA试剂A与1 ml BCA试剂B混合。
注意:使用以下公式确定所需工作试剂的总量。 (标准品+待测样品)x(重复次数)x(每个样品所需要的BCA工作液)=所需BCA工作液总体积。
2.按照表1配制新的标准品体系。 (用0.9%NaCl或PBS稀释白蛋白(BSA)标准液)

表1:白蛋白(BSA)标准品的制备

Tube Number 稀释液体积 (μl) BSA体积 (μl) BSA终浓度 (μg/ml)
A 0 μl 900 μl of 2 mg/ml Stock 2000 μg/ml
B 100 μl 300 μl of tube A 1500 μg/ml
C 300 μl 300 μl of tube A 1000 μg/ml
D 200 μl 200 μl of tube B 750 μg/ml
E 300 μl 300 μl of tube C 500 μg/ml
F 300 μl 300 μl of tube E 250 μg/ml
G 300 μl 300 μl of tube F 125 μg/ml
H 400 μl 100 μl of tube G 25 μg/ml
I 300 μl 0 0 (blank)

3.将0.1 ml的每种标准品和蛋白质样品加入单独的标记试管中。
4.在每个试管中加入2 ml BCA工作试剂并充分混合。
5.在37°C下孵育30分钟。
注意:增加孵育时间和温度会增加每次测试的净562 nm吸光度,并同时降低试剂盒的最低检测水平和测试范围。
6.将所有管子冷却到室温(RT)。
7.将分光光度计的波长设置为OD 562 nm。 用水将仪器校准为零。 随后,在10分钟内测量所有样品的吸光度。
注意:即使冷却至室温后,色彩仍会继续显影。 但是,如果所有吸光度测量均在10分钟内进行,则随后在RT处的显影太弱而不会产生明显的误差。
8.从所有读数中减去空白的OD562。
9,绘制BSA标准曲线:OD562(Y轴)vs BSA标准浓度(X轴)。 使用标准曲线确定每个待测样品的蛋白质浓度。

B. 微孔检测法

1.以50:1的比例混合BCA试剂A和BCA试剂B。 即将50 ml BCA试剂A与1 ml BCA试剂B混合。
注意:使用以下公式确定所需工作试剂的总量。 (标准品+待测样品)x(重复次数)x(每个样品所需要的BCA工作液)=所需BCA工作液总体积。
2.按照表2配制新的标准品体系。 (用0.9%NaCl或PBS稀释白蛋白(BSA)标准液)

表2:白蛋白(BSA)标准品的制备

Tube Number 稀释液体积(μl) BSA体积 (μl) BSA终浓度 (μg/ml)
A 0 μl 200 μl of 2 mg/ml Stock 2000 μg/ml
B 30 μl 90 μl of tube A 1500 μg/ml
C 60 μl 60 μl of tube A 1000 μg/ml
D 60 μl 60 μl of tube B 750 μg/ml
E 60 μl 60 μl of tube C 500 μg/ml
F 60 μl 60 μl of tube E 250 μg/ml
G 60 μl 60 μl of tube F 125 μg/ml
H 100 μl 25 μl of tube G 25 μg/ml
I 60 μl 0 0 (blank)

3.将25μl的每种标准品和蛋白质样品添加到单独的微孔板孔中。
4.向每个孔中添加200μlBCA工作试剂并混合。
5.密封板并在37°C下孵育30分钟。
6.将板冷却至室温(RT)。
7.在10分钟内在读板器上测量562 nm的吸光度。
8.从所有读数中减去空白的OD562。 绘制BSA标准曲线:OD562(在Y轴上)对BSA标准浓度(在X轴上)。 使用标准曲线确定每个待测样品的蛋白质浓度。

重要产品信息

1.如果将本试剂盒冷藏或存放在冷库中,则试剂A或试剂B中可能会形成沉淀物。要溶解沉淀物,请在37°C下缓慢加热溶液,同时进行混合或微波处理几秒钟。如果试剂盒被细菌污染,则将其丢弃
2.如果样品中仍然存在还原性物质或金属螯合物而引起干扰,建议使用Bradford分析试剂盒。
3.建议一式两份地测定不同浓度和样品的标准液。每种测定均应绘制标准曲线。
4.彻底混合试剂A和试剂B后,新形成的绿色浊度将消失。它不会影响性能。
5.使用分光光度计检测蛋白质浓度时,测定的样品量将减少。使用37°C的培养箱时,请防止水蒸发的影响。
6.消除或最小化干扰物质影响的几种方法:
•通过透析或凝胶过滤去除干扰物质。
•稀释样品,直到物质不再干扰为止。
•由于高浓度的去污剂也会影响结果,因此请用三氯乙酸(TCA)沉淀样品中的蛋白质。
7,避免使用包括还原性物质,螯合剂,强酸和强碱在内的物质,因为即使浓度很低也会干扰蛋白质的估算。

产品组成

Components 500 tests 2500 tests 5000 tests
BCA Reagent A 100 mL 500 mL 500 mL × 2
BCA Reagent B 3 mL 5 mL × 3 5 mL × 6
Albumin (BSA) Standards
2mg/mL
1 mL × 2 1 mL × 10 2 mL × 10

功能属性

应用&特点Western blotting
Protein expression assays
Protein profiling and characterization
Protein quantitation assays
运输方式Ship with blue ice.
储存条件BCA Reagent A and B store at room temperature.It is stable at room temperature for one year. Albumin (BSA) Standards store at -20°C.
用途仅供研究使用!不能用于人体。

产品描述

BCA Protein Assay Kit是一种即用型的Western blot相关总蛋白分析试剂,可通过测量562 nm处的吸光度并与蛋白标准物的吸光度-浓度曲线进行比较,快速测定总蛋白浓度。蛋白质定量过程可以在45分钟内完成。
基于BCA(Bicin -choninic   Acid)法研制而成,实现了对蛋白质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定。其原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽链结构能与Cu2+络合生成络合物,同时将Cu2+还原成Cu+。该测定法的紫色反应产物是由两个BCA分子与一个亚铜离子螯合形成的。这种水溶性复合物在562 nm处表现出很强的吸光度,在较宽的工作范围(20-2,000μg/ ml)中,随着蛋白质浓度的增加,吸光度几乎呈线性。
BCA方法不是真正的端点方法;也就是说,最终颜色会继续变化。但是,孵育后,颜色变化的速度足够慢可以允许分析大量的样品。据报道,蛋白质的大分子结构,肽键的数量以及四种特定氨基酸(半胱氨酸,胱氨酸,色氨酸和酪氨酸)的存在与BCA的颜色形成有关。对二肽,三肽和四肽的研究表明,颜色形成的程度不仅仅是由单个产生颜色的官能团的总和引起的。
因此,通常参考诸如牛血清白蛋白(BSA)的常见蛋白质的标准来确定待测蛋白质浓度。从蛋白质制备一系列已知浓度的稀释液,并与待测物一起进行测定,然后根据标准曲线确定每个待测物的浓度。如果需要精确定量待测蛋白质,建议选择质量与待测蛋白质相似的蛋白质标准品。例如,在测定免疫球蛋白样品时,可以使用牛γ球蛋白(BGG)标准品。在介绍了两种检测法中,其中,试管检测法需要更大体积(0.1毫升)的蛋白质样品;但是,由于它使用的样品与工作试剂之比为1:20(v / v),因此干扰物质的影响降至最低。