DSP
(Synonyms: 3,3'-二硫代二丙酸二(N-羟基丁二酰亚胺酯),3,3′-Dithiodipropionic acid di) 目录号 : GC18378
DSP是一种与赖氨酸等氨基反应的同源双功能交联剂，广泛用于表面功能化，是将酶和抗体固定在金表面的首选连接分子。
Cas No.:57757-57-0
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
_1-3.$$$39978408@51.jpg');)
_1-9.$$$38538795@65.jpg');)
_1-9.$$$39112701@51.jpg');)
_1-7.$$$37316672@70.jpg');)
_366-372.$$$36198801@70.jpg');)
.$$$38565142@65.jpg');)
_1867-1883.$$$33248023@67.jpg');)
_eads6055.$$$39977546@45.jpg');)
_eadm9805.$$$40080571@45.jpg');)
_eadj3020.$$$39666821@45.jpg');)
_1-20.$$$39757301@28.jpg');)
_1-24.$$$38898113@28.jpg');)
_273-287.$$$36806353@46.jpg');)
_1-16.$$$37156877@44.jpg');)
_1-19.$$$37460805@44.jpg');)
_1291-1307.$$$34518654@46.jpg');)
DSP, a homobifunctional cross-linker that reacts with amino groups such as lysine, and is widely used for surface functionalization, is the preferred linker for immobilizing enzymes and antibodies on gold surfaces[1-3]. DSP has a disulfide bridge within its structure, which cleaves upon binding to gold[2]. By immobilizing DSP on a gold thin film (GTF), dopamine (DA) can be selectively captured via the specific reaction between its primary amine and the NHS ester of DSP, enabling sensitive detection of DA in human cerebrospinal fluid (CSF) samples[4-5]. DSP can be employed in irreversible biotinylation procedures (IBP) to eliminate interference from intermolecular disulfide bonds during S-nitrosation detection[6]. DSP can also be used to isolate weak protein complexes and to prepare Au-TiO2 thin films for immunoassay experiments[3, 7].
References:
[1] Darder M, Takada K, Pariente F, et al. Dithiobissuccinimidyl propionate as an anchor for assembling peroxidases at electrodes surfaces and its application in a H2O2 biosensor. Anal Chem. 1999;71(24):5530-5537
[2] Ataman Sadık D, Boyacı İH, et al. Mixed monolayer decorated SPR sensing surface for thrombin detection. J Pharm Biomed Anal. 2019;176:112822.
[3] Akaki K, Mino T, Takeuchi O. DSP-crosslinking and Immunoprecipitation to Isolate Weak Protein Complex. Bio Protoc. 2022;12(15):e4478.
[4] Zhang K, Liu Y, Wang Y, et al. Quantitative SERS Detection of Dopamine in Cerebrospinal Fluid by Dual-Recognition-Induced Hot Spot Generation. ACS Appl Mater Interfaces. 2018;10(18):15388-15394.
[5] Gu H, Guo Y, Xiao X, et al. Double molecular recognition strategy based on boronic acid-diol and NHS ester-amine for selective electrochemical detection of cerebral dopamine. Anal Bioanal Chem. 2020;412(15):3727-3736.
[6] Huang B, Chen C. Detection of protein S-nitrosation using irreversible biotinylation procedures (IBP). Free Radic Biol Med. 2010;49(3):447-456.
[7] Meira DI, Barbosac AI, Proença M, et al. Immobilizing antibody biorecognition layers on Au–TiO2 thin films: direct (physisorption) vs. DSP-crosslinking (chemisorption) surface functionalization. Journal of Physics D: Applied Physics. 2024;415401.
DSP是一种与赖氨酸等氨基反应的同源双功能交联剂，广泛用于表面功能化，是将酶和抗体固定在金表面的首选连接分子[1-3]。DSP内含二硫键，可与金结合时断裂[2]。将DSP固定于金薄膜（GTF）后，可通过NHS酯与多巴胺（DA）伯胺的特异性反应选择性捕获DA，从而在人脑脊液（CSF）样本中实现高灵敏检测[4-5]。DSP可用于不可逆生物素化程序（IBP）处理中，排除分子间二硫键对S-亚硝基化检测的干扰[6]。DSP还可用于分离弱蛋白复合物及制备用于免疫分析实验的Au-TiO2薄膜[7-8]。
该计划仅提供一个指导方案，请根据具体需求进行修改。
（1）DSP交联与免疫沉淀分离弱相互作用蛋白复合物[1]：
A. 制备表达目标蛋白（POI）的细胞
1. 每样品取8.0×105个HeLa细胞铺于10cm皿中（每皿10mL含10% FBS的DMEM）。
2. 37°C、5% CO2培养24h。
3. 转染FLAG-HA双标签POI表达质粒。
4. 37°C、5% CO2过夜培养。
B. 配制洗涤缓冲液（Wash buffer）和免疫沉淀缓冲液（IP buffer）
1. DSP交联与免疫沉淀当天，先配制Wash buffer与IP buffer，置于冰上待用。
C. DSP交联
1. 临用前新鲜配制100mM DSP。
2. 取100mM DSP用预热至37°C的PBS稀释成0.1mM。
3. 每皿用5mL预热37°C PBS洗涤两次。
4. 弃尽PBS。
5. 每皿加入5mL 0.1mM DSP（步骤C2配制）。
6. 37°C、5% CO2培养箱孵育30min。
D. 制备第一次IP磁珠
1. 在步骤C6孵育期间，按每样品40μL Dynabeads Protein G的量集中分装于1.5mL管中。
2. 用等体积Wash buffer洗磁珠三次：将管置于磁力架，待磁珠吸附后吸弃上清；加入冰Wash buffer；离架，吹打重悬；重复两次。
3. 最后一次弃尽上清。
4. 用冰IP buffer重悬磁珠。
5. 每样品加入1μL抗FLAG抗体。
6. 4°C旋转孵育1h。
E. 终止DSP交联
1. 步骤C6 30min后，弃0.1mM DSP，每皿用5mL预热37°C PBS冲洗一次。
2. 弃PBS，每皿加5mL室温STOP溶液。
3. 室温孵育15min。
F. 第一次免疫沉淀（IP）
1. 弃STOP溶液。
2. 每皿用5mL冰PBS洗两次。
3. 弃PBS。
4. 每皿加500μL冰IP buffer。
5. 用细胞刮刮下细胞，连同缓冲液一并转入1.5mL管（每样1管）。
6. 吹打重悬。
7. 冰上裂解10min。
8. 4°C、20,000×g离心5min。
9. 取500μL上清至新管用于IP。
10. 加入40μL步骤D6制得的抗FLAG抗体磁珠。
11. 4°C旋转孵育2h。
G. 制备第二次IP磁珠
1. 步骤F11孵育结束前约30min，按步骤D1-D4洗涤新的Dynabeads Protein G。
2. 每样品加入1μL抗HA抗体。
3. 4°C旋转孵育1h。
H. 用FLAG肽洗脱
1. 用TBS稀释FLAG肽储备液，配制FLAG洗脱缓冲液，置冰上。
2. 步骤F11孵育后，用700μL冰Wash buffer洗磁珠三次。
3. 弃尽Wash buffer。
4. 温和吹打，用100μL FLAG洗脱缓冲液重悬磁珠。
5. 4°C旋转孵育10min。
6. 磁力架分离，将含POI及其结合蛋白的上清转至新1.5mL管。
7. 重复步骤H4-H5一次。
8. 合并两次洗脱液。
9. 加入300μL冰IP buffer（终体积500μL/样）。
I. 第二次免疫沉淀
1. 将500μL步骤H9洗脱液与40μL步骤G3制得的抗HA抗体磁珠混合。
2. 4°C旋转孵育2h。
J. 最终洗脱
1. 步骤I2孵育后，用700μL冰Wash buffer洗磁珠三次。
（2）小鼠脑组织裂解液的DSP处理[2]：
1. 将小鼠脑组织裂解液用5mM DSP处理30min，以在体外形成分子间二硫键（Pr-S-S-Pr），随后加入Tris缓冲液终止反应。
2. 处理后的裂解液分别采用原始生物素交换法和不可逆生物素化程序（IBP）进行分析。
（3）用DSP制备用于免疫分析实验的Au-TiO2薄膜[3]：
1. 将经等离子体活化的Au-TiO2薄膜用溶于无水二甲基亚砜（DMSO，≥99.9%）的DSP溶液进行功能化，DSP浓度分别为0.4、1、4和10mg/mL。
2. 固定时间为30min，随后依次用DMSO、PBS（磷酸盐缓冲液；pH7.4；10mM）和96%乙醇进行清洗，以去除未结合的交联剂分子。
References:
[1] Akaki K, Mino T, Takeuchi O. DSP-crosslinking and Immunoprecipitation to Isolate Weak Protein Complex. Bio Protoc. 2022;12(15):e4478.
[2] Huang B, Chen C. Detection of protein S-nitrosation using irreversible biotinylation procedures (IBP). Free Radic Biol Med. 2010;49(3):447-456.
[3] Meira DI, Barbosac AI, Proença M, et al. Immobilizing antibody biorecognition layers on Au–TiO2 thin films: direct (physisorption) vs. DSP-crosslinking (chemisorption) surface functionalization. Journal of Physics D: Applied Physics. 2024;415401.
| Cas No. | 57757-57-0 | SDF | |
| 别名 | 3,3'-二硫代二丙酸二(N-羟基丁二酰亚胺酯),3,3′-Dithiodipropionic acid di | ||
| 分子式 | C14H16N2O8S2 | 分子量 | 404.41 |
| 溶解度 | DMF: 30 mg/ml,DMSO: 30 mg/ml,DMSO:PBS (pH 7.2) (1:4): 0.20 mg/ml | 储存条件 | 4°C, protect from light, stored under nitrogen |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.4727 mL | 12.3637 mL | 24.7274 mL |
| 5 mM | 0.4945 mL | 2.4727 mL | 4.9455 mL |
| 10 mM | 0.2473 mL | 1.2364 mL | 2.4727 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >97.00%
- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet