DBCO-NHS ester
(Synonyms: 二苯并环辛炔-N-羟基琥珀酰亚氨基基酯) 目录号 : GC39241
DBCO-NHS ester是一种交联剂，用于将DBCO基团共价连接到含胺分子上。
Cas No.:1353016-71-3
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
DBCO-NHS ester is a crosslinker used to covalently attach DBCO groups to amine-containing molecules [1]. DBCO-NHS ester is commonly used for bioorthogonal labeling and molecular coupling in copper-free click chemistry [2-3].
References:
[1]. Hu B, Ji C, Zhou Z, et al. Bioorthogonal reaction-mediated photosensitizer–peptide conjugate anchoring on cell membranes for enhanced photodynamic therapy. Biomaterials Science. 2025.
[2]. Tan A, Liu Q, Septiadi D, et al. Understanding selectivity of metabolic labelling and click-targeting in multicellular environments as a route to tissue selective drug delivery. Journal of Materials Chemistry B. 2021 Jul 7; 9(26): 5365-5373.
[3]. Wiener J, Kokotek D, Rosowski S, et al. Preparation of single-and double-oligonucleotide antibody conjugates and their application for protein analytics. Scientific reports. 2020 Jan 29; 10(1): 1457.
DBCO-NHS ester是一种交联剂，用于将DBCO基团共价连接到含胺分子上 [1]。DBCO-NHS ester常用于无铜点击化学中的生物正交标记和分子偶联 [2-3]。
本方案描述了DBCO-NHS ester修饰的蛋白质与叠氮化物染料的无铜点击反应。实际应用条件可能需要根据研究设计进行优化 [1-2]。
1. 试剂和材料准备
DBCO-NHS ester、目标蛋白质、叠氮化物修饰的荧光染料、PBS、碳酸盐缓冲液。
2. 实验步骤
（1）蛋白质的DBCO修饰
将目标蛋白质溶于pH 8.5的碳酸盐缓冲液中，浓度≥1mg/mL。将DBCO-NHS ester溶于无水DMSO（控制DMSO在标记液中的终浓度≤10%），并以DBCO：蛋白质比例5-20:1加入蛋白质溶液中。涡旋混合，室温避光孵育2小时（或4℃过夜）。用预冷的PBS（pH 7.4）平衡脱盐柱，将反应液上样至柱上，离心收集纯化的蛋白质。测定蛋白浓度，分装后-80℃冷冻保存。
（2）DBCO-叠氮化物点击反应
将叠氮化物染料（例如Azide-Cy5）用DMSO配制成1-10mM的原液，避光保存。将DBCO修饰的蛋白与叠氮化物染料以1:1.5-3（摩尔比）的比例溶于PBS（pH 7.4）中混合。涡旋混合，室温避光反应1-4小时（或4℃避光反应过夜）。使用脱盐柱或透析（PBS，4℃避光）去除游离染料。进行SDS-PAGE（荧光扫描）或紫外-可见光谱分析（计算染料/蛋白比，DOL）。
注意事项
（1）无水操作：DBCO-NHS ester易水解，需在干燥环境中溶解（用氮气吹扫过的DMSO进行溶解）。
（2）摩尔比优化：过高的DBCO比例可能导致蛋白聚集，建议先测试5:1、10:1、15:1梯度。
（3）避光低温：DBCO和荧光染料均对光敏感，因此整个过程应避光；纯化在4℃下进行。
（4）避免干扰：避免反应体系被含有硫醇（例如DTT、β-巯基乙醇）或叠氮化物的缓冲液污染。
（5）细胞实验验证：若用于活细胞标记，需验证修饰蛋白的生物活性及叠氮化物染料的细胞通透性。
References:
[1]. Ciferri MC, Bruno S, Rosenwasser N, et al. Standardized method to Functionalize plasma-extracellular vesicles via copper-free click Chemistry for targeted drug delivery strategies. ACS Applied Bio Materials. 2024 Jan 16; 7(2): 827-838.
[2]. Lee HJ, Fernandes-Cunha GM, Putra I, et al. Tethering growth factors to collagen surfaces using copper-free click chemistry: surface characterization and in vitro biological response. ACS applied materials & interfaces. 2017 Jul 19; 9(28): 23389-23399.
| Cas No. | 1353016-71-3 | SDF | |
| 别名 | 二苯并环辛炔-N-羟基琥珀酰亚氨基基酯 | ||
| Canonical SMILES | O=C(N1CC2=CC=CC=C2C#CC3=CC=CC=C31)CCC(ON4C(CCC4=O)=O)=O | ||
| 分子式 | C23H18N2O5 | 分子量 | 402.4 |
| 溶解度 | DMSO: 100 mg/mL (248.51 mM) | 储存条件 | Store at -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.4851 mL | 12.4254 mL | 24.8509 mL |
| 5 mM | 0.497 mL | 2.4851 mL | 4.9702 mL |
| 10 mM | 0.2485 mL | 1.2425 mL | 2.4851 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
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