5(6)-FITC
(Synonyms: 异硫氰酸荧光素,Fluorescein 5(6)-isothiocyanate; Fluorescein isothiocyanate 5- and 6- isomers) 目录号 : GC33440
5(6)-FITC是一种荧光染料衍生物，激发/发射波长约为492–495nm/518–521nm。
Cas No.:27072-45-3
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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5(6)-FITC is a fluorescent dye derivative with an excitation/emission wavelength of approximately 492–495nm/518–521nm [1]. The terminal isothiocyanate group (–N=C=S) of 5(6)-FITC can covalently bind to nucleophilic groups such as amino groups and sulfhydryl groups in proteins or nucleic acids [2]. 5(6)-FITC is often used to label biological molecules such as antibodies and oligonucleotides, which facilitates fluorescence microscopy observation, flow cytometry, ELISA, and Western blot experiments [3].
References:
[1]. Miller J S, Quarles J M. Flow cytometric identification of microorganisms by dual staining with FITC and PI[J]. Cytometry: The Journal of the International Society for Analytical Cytology, 1990, 11(6): 667-675.
[2]. Twining S S. Fluorescein isothiocyanate-labeled casein assay for proteolytic enzymes[J]. Analytical biochemistry, 1984, 143(1): 30-34.
[3]. Oddone N, Zambrana A I, Tassano M, et al. Cell uptake mechanisms of PAMAM G4-FITC dendrimer in human myometrial cells[J]. Journal of nanoparticle research, 2013, 15(7): 1776.
5(6)-FITC是一种荧光染料衍生物，激发/发射波长约为492–495nm/518–521nm [1]。5(6)-FITC的末端异硫氰酸酯基团（-N=C=S）可以与蛋白质或核酸中的氨基、巯基等亲核基团共价结合 [2]。5(6)-FITC常用于标记抗体、寡核苷酸等生物分子，方便荧光显微镜观察、流式细胞术、ELISA和蛋白质印迹实验 [3]。
本方案描述了如何使用5(6)-FITC标记蛋白质，用于后续荧光检测。实际实验条件可能需要根据检测设计进行优化 [1–2]。
1. 试剂和材料
待标记蛋白质，5(6)-FITC，二甲基亚砜（DMSO），0.1M 碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液，pH 8.3。
2. 蛋白质溶液的制备
将蛋白质溶于碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液中（终浓度为2-10mg/mL）。
3. 5(6)-FITC溶液的制备
将5(6)-FITC溶于DMSO中，终浓度为1-10mg/mL。新鲜配制，避光保存。
4. 标记反应
在轻轻搅拌下，将5(6)-FITC溶液逐滴加入蛋白质溶液中（建议摩尔比：每1mol蛋白质5-20mol 5(6)-FITC）。将反应混合物在室温（20-25℃）下避光孵育1-2小时（用箔纸包裹）。
5. 游离5(6)-FITC的去除
脱盐柱法：将反应混合物上样至预平衡的Sephadex G-25柱（加入PBS或所需缓冲液），并根据制造商的说明收集蛋白标记的级分。透析法：将混合物转移至透析管中（截止分子量10kDa），并在4℃下用1L PBS（或所选缓冲液）透析12-24小时，至少更换缓冲液3次。
6. 蛋白质和5(6)-FITC浓度的测定
通过280nm处的吸光度测量蛋白质浓度。通过495nm处的吸光度测量5(6)-FITC浓度。
注意事项
（1）始终在黑暗中处理5(6)-FITC，以避免光漂白。
（2）为获得最佳结果，请根据您的具体应用优化5(6)-FITC/蛋白质比例。
（3）将标记蛋白质分装，避光保存于-20℃。
References:
[1]. Chaganti L K, Venkatakrishnan N, Bose K. An efficient method for FITC labelling of proteins using tandem affinity purification[J]. Bioscience reports, 2018, 38(6): BSR20181764.
[2]. Hungerford G, Benesch J, Mano J F, et al. Effect of the labelling ratio on the photophysics of fluorescein isothiocyanate (FITC) conjugated to bovine serum albumin[J]. Photochemical & Photobiological Sciences, 2007, 6(2): 152-158.
| Cas No. | 27072-45-3 | SDF | |
| 别名 | 异硫氰酸荧光素,Fluorescein 5(6)-isothiocyanate; Fluorescein isothiocyanate 5- and 6- isomers | ||
| Canonical SMILES | OC1=CC=C(C2(O3)C(C=C(N=C=S)C=C4)=C4C3=O)C(OC5=C2C=CC(O)=C5)=C1.OC6=CC=C(C7(O8)C(C=CC(N=C=S)=C9)=C9C8=O)C(OC%10=C7C=CC(O)=C%10)=C6 | ||
| 分子式 | C21H11NO5S | 分子量 | 389.38 |
| 溶解度 | DMSO : ≥ 156 mg/mL (400.64 mM) | 储存条件 | Store at 2-8°C, protect from light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.5682 mL | 12.8409 mL | 25.6819 mL |
| 5 mM | 0.5136 mL | 2.5682 mL | 5.1364 mL |
| 10 mM | 0.2568 mL | 1.2841 mL | 2.5682 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
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