TRIzol Reagent

Name: TRIzol Reagent
SKU: GK20008
Availability: InStock
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目录号 : GK20008

TRIzol试剂是一种可以从动物和植物样本中提取RNA的产品。

TRIzol Reagent Chemical Structure

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100mL	¥1,000.00	现货
200mL	¥1,800.00	现货

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Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.

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产品描述实验参考方法特征&属性产品文档相关产品

Description

TRIzol试剂是一种可以从动物和植物样本中提取RNA的产品。在TRIzol试剂的作用下，样本可以完全裂解。在样品均质或裂解过程中，它能够保持RNA的完整性，同时溶解细胞并溶解细胞内容物。 TRIzol试剂具有强大的广谱性，并可应用于从各种样品中提取总RNA。提取过程方便快捷，整个操作可以在一个小时内完成。该试剂可用于小样本（50-100毫克组织、1x10⁶个细胞），也适用于大样本（≥1克组织、＞10⁷个细胞）。它适用于人类、动物、植物组织和细菌，并且可以同时处理大量不同类型的样品，在一个小时内完成整个提取过程。分离出来的总RNA蛋白质和DNA极低污染，并可用于Northern Blot、反转录、polyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和基因克隆等实验研究。

实验参考方法

自备试剂

氯仿，异丙醇，70％乙醇（DEPC 水配置），无 Rnase 的 H₂O。

Ⅰ实验前准备

RNA 制备的关键是要抑制细胞中的 RNA 分解酶和防止所用器具及试剂中的 RNA 分解酶的污染。因此，在实验中必须采取以下措施：
戴一次性干净手套；使用 RNA 操作专用实验台；在操作过程中避免讲话等等。通过以上办法可以防止实验者的汗液、唾液中的 RNA分解酶的污染。

注意事项：

1. 尽量使用一次性塑料器皿，若用玻璃器皿，应在使用前用 0.1%DEPC 水溶液在 37°C 处理 12h，然后在 120°C 高压灭 30min 以除去残留的 DEPC。
2. 用于 RNA 实验的试剂，须使用干热灭菌（180°C，60min）或使用上述方法进行 DEPC 水处理灭菌后的玻璃容器盛装（也可以使用 RNA 实验用的一次性塑料容器)，使用的无菌水须用 0.1%的 DEPC 处理后再进行高温高压灭菌。
3. RNA 实验用的试剂和无菌水都应专用，避免混用后交叉污染。

Ⅱ 实验操作

TRIzol 试剂的用法如下

样品类型	样品规格	TRIzol 用量
贴壁培养细胞	10 cm²	1 mL
悬浮培养细胞	1x10⁶-10x10⁶	1 mL
普通组织样本（肌肉等）	50-100 mg	1 mL
特殊组织样品（脾，肝脏等）	30-50 mg	1-2 mL
植物组织	30-50 mg	1 mL
白细胞	1x10⁶	1 mL

样品规格 和 RNA 产量

样品类型	样品规格	RNA 产量
白细胞	1x10⁶	10~20 μg
植物组织	25 mg	10~20 μg
细胞	1x10⁶	8~15 μg
肌肉/脑等组织	50 mg	10~25 μg
肝脏	50 mg	100~300 μg

TRIzol 使用说明

	贴壁培养细胞	悬浮细胞，酵母，细菌	动物和植物组织
1. 样品预处理	从每 10 cm²的培养细胞中倒出培养液，并用 PBS 洗涤一次，以除去尽可能多的过量溶液。	将悬浮培养的细胞与培养液一起倒入离心管中，以 8,000 rpm 离心 2 分钟，弃去上清液，然后加入 50μl 无菌水重悬细胞，直到没有明显的沉淀为止。	将样品转移到用液氮预冷却的研钵中，用杵研磨组织，并在此期间连续添加液氮，直到将其研磨成粉末。
2. 加入TRIzol	加入 1 ml 的TRIzol，使裂解物均匀地分布在细胞表面，然后使用移液器吹干细胞。将细胞裂解液转移至1.5ml EP管中。	加入 1ml TRIzol。	将磨碎的组织添加到含有 1 ml TRIzol 的 1.5 ml EP 管中。
3. 裂解样品	加入 TRIzol 后，立即用腕力将其翻转过来，直到细胞和组织粉末均匀分散而没有结块。在室温下放置5分钟，以完全分离核酸-蛋白质复合物。
4. 加入氯仿	加入 200μl 氯仿，用手腕剧烈摇晃 15 秒钟，然后在室温下放置 2 分钟。
5. 离心分层	以 13,000 rpm 离心 10 分钟，然后将600μl 无色上清液转移至新的 1.5EP 管中。
6. 加入异丙醇	向上述 600μl 上清液中加入 600μl 异丙醇，用手腕将其上下颠倒几次，然后在-20°C 下放置 5 分钟。
7. 离心总RNA	以 13,000 rpm 离心 10 分钟，小心丢弃上清液，并保存底部总 RNA 沉淀。
8. 冲洗总RNA	向沉淀的每个试管中加入 1ml 70％乙醇，上下颠倒数次，然后以 13,000 rpm 离心 5 分钟。小心丢弃上清液并保存底部 RNA 沉淀。
9. 再重复冲洗一次	重复步骤 8 ，然后再次洗涤。
10. 挥发性残留乙醇	倒掉洗液，再次短离心 10s 后，用 10 μl Tip 头吸干剩余的洗液，置于室温使乙醇挥发干净（～20min）。
11. 溶解总RNA	每管加入 20～100 μl TE Buffer 或 RNase Free H₂O 溶解总 RNA。

常见问题

1. 提取率低。可能的原因：（a. 样品裂解或匀浆处理不彻底； b. RNA 沉淀未完全溶解）。

2. A260/A280<1.65。可能原因：（a. 检测吸光度时，RNA 样品没有溶于水，而溶于了 TE 中；b. 样品匀浆时加的组织量过多；c. 分层后，吸取上清液不足 500 μl ；d. 吸取水相时混入了有机相）。

3. DNA 污染过多。可能原因：（a. 样品匀浆时加的试剂量太少或组织量过多；b. 样品中含有有机溶剂）。

功能属性

应用&特点	• 允许从同一样品中分离 RNA，DNA 和蛋白质 • 提供出色的裂解能力，即使样品类型复杂 • 针对组织，细胞，血清，病毒和细菌的优化配方和方案
运输方式	Ship with blue ice.
储存条件	Store at 2-8°C,protected from light for 2 years.
用途	仅供研究使用!不能用于人体。

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