RNase R
目录号 : GE10003
RNase R is an E
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
RNase R is an E. coli exoribonuclease which exhibits 3’-to-5’ exonuclease activity, efficiently digesting nearly all linear RNA species.
用途：环状RNA研究，环状RNA中去除线性RNA，可变剪接研究，内含子套索序列的分析和鉴定等。
来源：由大肠杆菌表达，表达基因为E.coli RNase R基因。
活性定义：One unit converts 1μg of poly-r(A) into acid-soluble nucleotides in 10 minutes at 37℃ in 20mM Tris-HCl (pH8.0), 100mM KCl and 0.1mM MgCl2。
纯度：不含DNase，不含其它RNA内切酶和外切酶活性。
酶储存溶液：50mM Tris-HCl (pH7.5 @25℃), 200mM NaCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 50% (v/v) Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100。
10XReaction Buffer：200mM Tris-HCl (pH8.0 @25℃), 1M KCl, 1mM MgCl2.
注意事项：
RNase R需要适当的镁离子浓度(0.1-1.0mM)才能发挥活性；反应体系中存在EDTA等可以螯合镁离子的螯合剂时，会显著降低RNase R活性。有必要时，可以考虑额外添加MgCl2使反应体系中游离的镁离子浓度至少达到0.1mM以上，以确保螯合剂不会螯合镁离子而影响酶活性。
使用说明：
1.RNase R的消化反应。
a.参考下表在冰上配制如下反应体系：
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Reagent |
Volume/Concentration |
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RNA |
<5µg |
>5µg |
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10X RNase R Reaction Buffer |
2µl |
5µl |
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RNase R (20U/µl) |
1-3U/µg RNA |
1-3U/µg RNA |
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DEPC-treated Water |
up to 20µl |
up to 50µl |
b.反应条件：37℃反应10-30min，70℃灭活10min。
注：RNase R的用量和反应体系的体积需要根据具体情况，通过实验进行摸索调整。
2.RNase R消化反应后，反应体系中环状RNA等的纯化回收。
a.苯酚/氯仿提取和乙醇沉淀纯化回收环状RNA等。
(a)加入Nuclease-free Water将反应体积放大到180μl，再加入20μl 3M醋酸钠(pH5.2)或20μl 5M醋酸铵，充分混匀。加入等体积的苯酚/氯仿混合液(1:1)抽提一次(剧烈Vortex 20-30s，随后12000rpm离心5-10min取上清。
(b)加入双倍体积的无水乙醇沉淀RNA，在-20℃至少孵育30分钟。随后12000rpm 4℃离心5-10min沉淀RNA。
(c)弃上清，用约500μl预冷的70%乙醇洗涤沉淀，以充分去除盐分。
(d)用DEPC-treated Water 重悬并溶解RNA，在-80℃储存。
b.使用RNA纯化柱或RNA纯化磁珠进行纯化回收。经过RNase R消化后的产物可以在70℃孵育10 min使酶失活后，通常无须进行纯化，就可以直接进行反转录，用于后续的RT-PCR、qPCR等。
References：
1. Suzuki, H. et al., Nucl Acids Res. 2006; 34(8):e63.
2. Vincent, H.A. and Deutscher, M.P., J Biol Chem. 2006; 281(40):29769.
| Cas No. | SDF | ||
| 分子式 | 分子量 | ||
| 溶解度 | 储存条件 | Store at -20℃ | |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。