Z-LLE-AMC
(Synonyms: N-[(苯基甲氧基)羰基]-L-亮氨酰-L-亮氨酰-N-(4-甲基-2-氧代-2H-1-苯并吡喃-7-基)-L-ALPHA-谷氨酰胺) 目录号 : GC45184Z-LLE-AMC是一种荧光底物，被特定的蛋白酶水解后，游离的AMC具有蓝色荧光（激发光为340-360nm，发射光为440-460nm），从而用于监测蛋白酶的活性水平。
Cas No.:348086-66-8
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
Z-LLE-AMC is a fluorescent substrate that, when hydrolyzed by specific proteases (20S proteasome, 26S proteasome), releases AMC with blue fluorescence (excitation at 340–360nm, emission at 440–460nm), which is used to monitor protease activity levels[1]. Z-LLE-AMC can be used to detect changes in caspase activity during apoptosis[2]. Z-LLE-AMC can also be used for high-throughput screening of drugs to identify compounds that can modulate protease activity[3].
References:
[1] Tadlock L, Yamagiwa Y, Hawker J, et al. Transforming growth factor-beta inhibition of proteasomal activity: a potential mechanism of growth arrest. Am J Physiol Cell Physiol. 2003 Aug;285(2):C277-85.
[2] Swatek A, Staszczak M. Effect of Ferulic Acid, a Phenolic Inducer of Fungal Laccase, on 26S Proteasome Activities In Vitro. Int J Mol Sci. 2020 Apr 2;21(7):2463.
[3] Barsan MM, Sanz CG, Onea M, et al. Immobilized Antibodies on Mercaptophenylboronic Acid Monolayers for Dual-Strategy Detection of 20S Proteasome. Sensors (Basel). 2021 Apr 12;21(8):2702.
Z-LLE-AMC是一种荧光底物，被特定的蛋白酶水解后，游离的AMC具有蓝色荧光（激发光为340-360nm，发射光为440-460nm），从而用于监测蛋白酶的活性水平[1]。Z-LLE-AMC可用于检测细胞凋亡过程中半胱天冬酶的活性变化[2]。Z-LLE-AMC还可用于高通量筛选药物，寻找能够调节蛋白酶活性的化合物[3]。
组织中蛋白酶体活性测定
本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1. 组织样本准备：样本在采集后需存储在-80℃下，以保持蛋白酶体完整性。
2. 制备澄清组织匀浆：将组织样本在缓冲液中匀浆。缓冲液的成分包括50mM Tris-HCl（pH 7.5）、200mM NaCl、1mM EDTA、1mM二硫苏糖醇、10%甘油、5mM MgCl₂、1mM ATP、10mM Na₂S₂O₅、亮肽素（0.5μg/mL）、抑肽酶（1μg/mL）和抑蛋白酶（1μg/mL）。
3. 检测蛋白酶体活性：使用Z-LLE-AMC作为底物来检测蛋白酶体的酶活。反应体系包含20mM Tris-HCl（pH 7.5）、30μM Z-LLE-AMC、1mM二硫苏糖醇、5mM MgCl₂和1mM ATP。反应在37℃下进行20分钟，加入0.5、1.0、1.5和2.0μL的组织匀浆液（总体积为100μL）。反应结束后，通过加入1%SDS终止反应。使用荧光光度计检测产物，激发波长为380nm，发射波长为440nm。
注意事项：
1）游离的荧光底物存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1] Erokhov PA, Kulikov AM, Karpova YD, et al. Proteasomes in Patient Rectal Cancer and Different Intestine Locations: Where Does Proteasome Pool Change? Cancers (Basel). 2021 Mar 5;13(5):1108.
| Cas No. | 348086-66-8 | SDF | |
| 别名 | N-[(苯基甲氧基)羰基]-L-亮氨酰-L-亮氨酰-N-(4-甲基-2-氧代-2H-1-苯并吡喃-7-基)-L-ALPHA-谷氨酰胺 | ||
| Canonical SMILES | O=C(N[C@@H](CC(C)C)C(N[C@@H](CC(C)C)C(N[C@@H](CCC(O)=O)C(NC1=CC=C(C(C)=CC(O2)=O)C2=C1)=O)=O)=O)OCC3=CC=CC=C3 | ||
| 分子式 | C35H44N4O9 | 分子量 | 664.8 |
| 溶解度 | DMSO: 50 mg/ml | 储存条件 | Store at -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.5042 mL | 7.5211 mL | 15.0421 mL |
| 5 mM | 300.8 μL | 1.5042 mL | 3.0084 mL |
| 10 mM | 150.4 μL | 752.1 μL | 1.5042 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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