4-Hydroxymephenytoin
(Synonyms: 羟基香豆素) 目录号 : GC33522
4-Hydroxymephenytoin是mephenytoin在人体内经CYP2C19催化的主要代谢产物，mephenytoin是一种抗癫痫药物，也是CYP2C19的典型底物。
Cas No.:61837-65-8
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
4-Hydroxymephenytoin is the major metabolite of mephenytoin in the human body catalyzed by CYP2C19, an anti-epileptic drug and a typical substrate of CYP2C19 [1]. 4-Hydroxymephenytoin is often used to develop ultra-performance liquid chromatography (UPLC) tandem mass spectrometry methods to evaluate CYP probe drugs and their related metabolites in human urine or plasma samples [2-3].
References:
[1]. Tanaka M, Kato K, Sudo KI, et al. Simple and selective assay of 4-hydroxymephenytoin in human urine using solid-phase extraction and high-performance liquid chromatography with electrochemical detection and its preliminary application to phenotyping test. Journal of Chromatography B: Biomedical Sciences and Applications. 1996 Feb 9; 676(1): 87-94.
[2]. Stewart NA, Buch SC, Conrads TP, et al. A UPLC-MS/MS assay of the “Pittsburgh cocktail”: six CYP probe-drug/metabolites from human plasma and urine using stable isotope dilution. Analyst. 2011; 136(3): 605-612.
[3]. Zhou HH. CYP2C19 genotype determines enzyme activity and inducibility of S-mephenytoin hydroxylase. Clinica chimica acta. 2001 Nov 1; 313(1-2): 203-208.
4-Hydroxymephenytoin是mephenytoin在人体内经CYP2C19催化的主要代谢产物，mephenytoin是一种抗癫痫药物，也是CYP2C19的典型底物 [1]。4-Hydroxymephenytoin常用于开发超高效液相色谱（UPLC）串联质谱方法，以评估人尿液或血浆样本中的CYP探针药物及其相关代谢物 [2-3]。
本方案仅提供实验指导。实际应用需根据您的研究目标、表达体系和分析平台进行优化和调整 [1-2]。
1. 试剂及材料准备：
CYP2C19酶源（例如人肝微粒体、转染表达细胞株或重组酶蛋白）。
探针底物：S-mephenytoin。
反应缓冲液：PBS。
NADPH辅酶：用于启动代谢反应。
有机溶剂：乙腈、甲醇，用于终止反应。
质谱内标：对映体内标。
4-Hydroxymephenytoin标准品：用于定量比对。
检测仪器：UPLC-MS/MS系统。
2. 反应体系配置：
(1) 将以下反应组分加入离心管（设计终体积为200μL）：
Tris-HCl缓冲液（100mM，pH 7.4）。
CYP2C19酶源（终浓度：0.1-0.5mg/mL蛋白）。
S-mephenytoin（10-100μM，根据Km值优化）。
NADPH（1mM，立即配制）。
(2) 将混合物在37°C预热5分钟。
(3) 加入NADPH后，反应正式开始，并在37°C孵育20-60分钟。
3. 终止和提取：
(1) 反应完成后，立即加入等体积的冰冷乙腈或甲醇终止反应。
(2) 高速离心（13,000 rpm，10分钟），收集上清液进行后续检测。
4. 分析检测（UPLC-MS/MS）：
(1) 使用UPLC-MS/MS分析4-Hydroxymephenytoin的浓度。
(2) 使用内标法或标准曲线法定量。
(3) 根据单位时间内产物的生成速率计算CYP2C19酶的活性。
5. 数据解释和应用：
通过比较4-Hydroxymephenytoin的生成速率来评估CYP2C19酶的表达或活性水平。
如果用于药物代谢分型，它可以用于区分快代谢者（EM）和慢代谢者（PM）。
它还可以用于抑制剂筛选、酶动力学研究或体外药物代谢评估。
操作注意事项：
1. S-mephenytoin为光敏性底物，避免强光照射。
2. NADPH必须在使用前即刻制备，以免反应体系氧化失活。
3. 建议使用同一批次的CYP酶源，以减少批次差异。
4. 保持反应体系pH值和温度恒定。
5. UPLC-MS/MS分析建议使用稳定同位素内标，以提高定量准确性。
References:
[1]. Stewart NA, Buch SC, Conrads TP, et al. A UPLC-MS/MS assay of the “Pittsburgh cocktail”: six CYP probe-drug/metabolites from human plasma and urine using stable isotope dilution. Analyst. 2011; 136(3): 605-612.
[2]. Zhou HH. CYP2C19 genotype determines enzyme activity and inducibility of S-mephenytoin hydroxylase. Clinica chimica acta. 2001 Nov 1; 313(1-2): 203-208.
| Cas No. | 61837-65-8 | SDF | |
| 别名 | 羟基香豆素 | ||
| Canonical SMILES | O=C1N(C)C(C(C2=CC=C(O)C=C2)(CC)N1)=O | ||
| 分子式 | C12H14N2O3 | 分子量 | 234.26 |
| 溶解度 | DMF: 25 mg/ml,DMSO: 25 mg/ml,DMSO:PBS (pH 7.2) (1:1): 0.5 mg/ml,Ethanol: 15 mg/ml | 储存条件 | Store at 4°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 4.2688 mL | 21.3438 mL | 42.6876 mL |
| 5 mM | 0.8538 mL | 4.2688 mL | 8.5375 mL |
| 10 mM | 0.4269 mL | 2.1344 mL | 4.2688 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
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