PNPP (p-nitrophenyl phosphonate disodium)

检测土壤磷酸酶活性^{[1, 2, 3]}
本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1、溶液配置：
①改良型通用缓冲液（MUB）：三（羟甲基）氨基甲烷3.025g；苹果酸2.90g；柠檬酸3.50g；硼酸1.57g；氢氧化钠，1N（当量浓度为1的氢氧化钠溶液）122ml；水-定容至250ml。
②PNPP (p-nitrophenyl phosphonate disodium)溶液，0.115mol/L，将1.927g PNPP (p-nitrophenyl phosphonate disodium)溶解于MUB中，并用MUB将溶液稀释至50ml。将溶液置于冰箱中保存。
③氯化钙，0.5mol/L，将73.5g CaCl₂·2H₂O溶于水中，并将溶液稀释至1L。
④氢氧化钠，0.5mol/L，将20g NaOH溶于水中，并将溶液稀释至1L。
⑤标准对硝基苯酚（pNP）溶液，将1.00g对硝基苯酚溶于水中，并将溶液稀释至1L。将溶液置于冰箱中保存。
2、将夏末采集的新鲜土壤样品筛至5毫米。
3、将1克土壤与0.2ml甲苯、4ml改良通用缓冲液（MUB）（测定ACP时pH为6.5，测定ALP时pH为11）和1ml PNPP (p-nitrophenyl phosphonate disodium)混合。
4、将混合物置于密封的离心管中，在37°C下孵化1h。
5、孵化结束后，加入1ml 0.5mol/L的氯化钙（CaCl₂）和4ml 0.5mol/L的氢氧化钠（NaOH），并充分混合。
6、用定性滤纸过滤土壤悬浮液，并使用分光光度计在405nm波长处通过比色法测量酶释放的对硝基苯酚（pNP）的黄色。
7、通过同时评估的校准曲线（将吸光度与增加的标准品pNP浓度溶液相关联）来外推土壤提取物中实际的pNP浓度。
8、将样品中的实际pNP浓度转换为酶活性率，以每千克干土每小时毫克pNP表示。

References:

[1] Tabatabai M A, Bremner J M. Use of p-nitrophenyl phosphate for assay of soil phosphatase activity[J]. Soil Biology & Biochemistry, 1969, 1(4):301-307.

[2] P. Campdelacreu Rocabruna, X. Domene, A. Matteazzi, et al. Effect of organic fertilisation on soil phosphatase activity, phosphorus availability and forage yield in mountain permanent meadows. Agriculture, Ecosystems & Environment, 368 (2024) 109006.

[3] Skujins J J, Braal L, Mclaren A D. Characterization of phosphatase in a terrestrial soil sterilized with an electron beam[J]. 1962.

 ADDIN EN.REFLIST