PNGase F

N-糖苷酶 F(PNGase F)) 是一种在糖胺键处水解的有效酶。它还有助于生成不含碳水化合物的肽和具有二-N-乙酰基壳二糖单元的寡糖。 肽-N-糖苷酶 F, 肽-N4-(乙酰-β-氨基葡萄糖)-天冬酰胺酰胺酶 水解来自糖肽和糖蛋白的所有类型的 N-聚糖链，除非它们携带存在于昆虫和植物糖蛋白中的 α1,3 连接的核心岩藻糖残基。根据当前的质量控制程序，不含污染的蛋白水解活性(x = H 或糖[s]). 水解来自糖肽和糖蛋白的所有类型的 N-聚糖链，除非它们携带存在于昆虫和植物糖蛋白中的 α1,3 连接的核心岩藻糖残基。根据当前的质量控制程序，不含污染的蛋白水解活性(x = H 或糖[s]). 一个单位是在 37 °C 和 pH 7.8 条件下，在 1 分钟内水解 1 nmol 丹磺酰纤维蛋白糖肽或 0.2 nmol 丹磺酰胎球蛋白糖蛋白的酶活性。

来源(Source): 大肠杆菌表达

比活性(Specific activity):1,800,000 U/mg

缓冲液组分(Buffer): 50 mM Tris, 2.5 mM EDTA, 25 mM NaCl, 50% glycerol,pH 9.0。

酶活定义(Unit Definition): 1个酶活力单位指在10 μL的反应体系中, 37℃条件下1小时从

10 μg变性RNase B中除去超过95%的碳水化合物所需要的酶量.

使用方法

1、变性条件下蛋白质去糖基化: 

1）将1μL 5%SDS和1μL 1 M DTT加入到12 μL目标糖蛋白(50 μg), 总体积14 μL

2）100℃温度下煮沸10 min使其变性，室温冷却5 min

3）加入2 μL的0.5M磷酸钠缓冲(pH 7.5). 如果pH在PNGase F(pH 6-10)范围内，可以使用其他缓冲液. 20 mL 0.5 M磷酸钠(调制pH 7.5)的配置: 8.4 mL 1 M Na2HPO4, 1.6 mL 1 M NaH2PO4.

4）加入2 μL的10%NP-40. 可用Triton X-100替代NP-40.PNGase F 的活性受 SDS 的抑制，所以在反应混合物中必须加入NP-40. 

5）加入1-2 μL的PNGase, 在37℃孵育1-3 h.

2、非变性条件下蛋白质去糖基化

1）在50 mM碳酸氢铵(pH 7.8)中加入20 μg的糖蛋白至终体积为18μL

2）加入1-2 μL的PNGase F, 在37°C孵育2-18 h

注意：在变性条件下大多数底物能够更好的去糖基化，在非变性条件下可能需要增加PNGase F的量和延长孵育时间. 具体酶浓度见管壁标签