PKH 67 Cell Membrane Labeling Kit
目录号 : GC26306PKH67 Cell Membrane Labeling Kit是一款基于绿色荧光探针PKH67的检测试剂盒，能够进行常规体外和体内细胞膜标记，适用于细胞增殖以及长期体内细胞跟踪等研究。
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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PKH67 Cell Membrane Labeling Kit是一款基于绿色荧光探针PKH67的检测试剂盒，能够进行常规体外和体内细胞膜标记，适用于细胞增殖以及长期体内细胞跟踪等研究。
PKH67是一种膜标记探针，结构上带有更长的脂肪族碳尾，能够稳定结合细胞膜中的脂质成分并发出荧光。PKH67具有细胞毒性小，脂溶性高，易穿透细胞膜，染色后荧光背景低，且邻近细胞不染色的特点。PKH67的最大激发波长为490nm，最大发射波长为502nm。
在细胞分裂增殖过程中，被标记细胞的PKH67荧光强度会随着细胞的分裂而逐渐减弱，标记的荧光可以均匀地分布到两个子代细胞中，子代细胞荧光强度是母细胞的一半。根据这一特点，可通过流式细胞仪进行细胞增殖、细胞周期估计和细胞分裂等研究。PKH67 Cell Membrane Labeling Kit最多可检测到六次甚至更多的分裂。
PKH67 Cell Membrane Labeling Kit可用于细胞的体外及体内示踪。PKH67在标记细胞内的荧光表达稳定，标记阳性率达98%以上，标记细胞形态良好，可有效观察细胞体外诱导分化。将标记细胞注射入体内，可有效追踪移植细胞在活组织中的迁移和分化情况。PKH67在体内的荧光半衰期为10-12天，可追踪观察时间长达数周。
PKH67 Cell Membrane Labeling Kit是一款基于绿色荧光探针PKH67的检测试剂盒，能够进行常规体外和体内细胞膜标记，适用于细胞增殖以及长期体内细胞跟踪等研究。
PKH67是一种膜标记探针，结构上带有更长的脂肪族碳尾，能够稳定结合细胞膜中的脂质成分并发出荧光。PKH67具有细胞毒性小，脂溶性高，易穿透细胞膜，染色后荧光背景低，且邻近细胞不染色的特点。PKH67的最大激发波长为490nm，最大发射波长为502nm。
在细胞分裂增殖过程中，被标记细胞的PKH67荧光强度会随着细胞的分裂而逐渐减弱，标记的荧光可以均匀地分布到两个子代细胞中，子代细胞荧光强度是母细胞的一半。根据这一特点，可通过流式细胞仪进行细胞增殖、细胞周期估计和细胞分裂等研究。PKH67 Cell Membrane Labeling Kit最多可检测到六次甚至更多的分裂。
PKH67 Cell Membrane Labeling Kit可用于细胞的体外及体内示踪。PKH67在标记细胞内的荧光表达稳定，标记阳性率达98%以上，标记细胞形态良好，可有效观察细胞体外诱导分化。将标记细胞注射入体内，可有效追踪移植细胞在活组织中的迁移和分化情况。PKH67在体内的荧光半衰期为10-12天，可追踪观察时间长达数周。
本方案仅供参考，请根据您的具体需求进行修改。
1.染色液配制：
（1）在首次使用前，从冰箱中取出试剂，静置几分钟恢复至室温。对Solution A（PKH67 stock solution）的管子进行短暂离心，将试剂充分集中在管底。
注意：Solution A极易降解，建议根据单次用量对Solution A进行分装，-20或-80℃避光保存，避免反复冻融。
（2）根据待测细胞样本数量，用Solution B将Solution A稀释10倍，再用合适的溶液（如无血清培养基、HBSS或PBS）稀释25倍，配制成染色工作液，现配现用。
注意：建议根据不同细胞及实验体系调整最佳工作液浓度。常用方案是将Solution A稀释250倍使用，部分细胞可能需要适当增加浓度。
2. 细胞染色
（1）在1.5ml锥底聚丙烯离心管中制备单细胞悬液，用无血清培养基清洗细胞一次。
（2）400×g离心细胞5min，得到松散的细胞沉淀。
（3）轻柔吸弃上清，注意不要吸到细胞。
（4）使用约100μl染色工作液充分重悬细胞，建议工作液中细胞浓度约为107/ml。
（5）2～8℃孵育15～30分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。
注意：
① 建议先在37℃孵育5min，再转移至4℃孵育15min。低温孵育可降低细胞对染料的内吞作用，有助于染料对细胞膜的标记，并且降低染料定位细胞质囊泡的可能性。
② 建议在染色过程中重悬细胞2~3次，有助于染料充分标记样品。
（6）20~25℃、400×g离心细胞10min，轻柔吸弃上清，然后使用PBS或无血清培养基清洗细胞2-2次，以确保完全去除未结合染料。
（7）通过流式细胞仪检测标记细胞，Ex/Em=490/502nm
注意事项
1、荧光染料均存在淬灭问题，实验过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
| Solution A | PKH67 stock solution | 0.1ml |
| Solution B | PKH67 dilution | 10ml |
| Storage | -20°C, protect from light | |