MitoMark Green I
目录号 : GC50453绿色荧光线粒体染色；细胞渗透性
Cas No.:201860-17-5
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >99.00%
- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1、制备染色液
（1）染料储存液:使用DMSO将MitoMark Green I溶解成1-5mM的储存液。配置好的储存液分装后于-20℃避光保存。
（2）染料工作液:用合适的缓冲液(如:无血清培养基，HBSS或PBS)稀释储存液，配制浓度为20-200nM的MitoMark Green I工作液。
注意:
①建议使用相对偏低浓度进行染色，若使用更高浓度可能会染上其他细胞结构，为了降低探针加载过度可能引起的假阳性，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度；
②若细胞在染色后在不含染料的培养基中孵育，会观察到荧光信号的衰减和细胞的空泡化现象；
③请根据实际情况调整及优化工作液浓度，现用现配。
2、细胞悬浮染色(以6 孔板为例)
（1）悬浮细胞经1000g离心3-5min。弃去上清液，使用PBS清洗两次，每次5分钟。
（2）贴壁细胞使用PBS清洗两次，加入胰酶消化细胞，消化完成后经1000g离心3-5min。
（3）加入1mL染料工作液重悬细胞，室温避光孵育15-45min分钟，不同细胞最佳培养时间不同。
（4）孵育结束后，经1000g离心5分钟，去除上清液，加入PBS清洗2-3次，每次5分钟。
（5）使用无血清细胞培养基或PBS重悬细胞，通过荧光显微镜或流式细胞技术进行观察。
3、细胞贴壁染色
（1）在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。
（2）从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中。
（3）从盖玻片的一角加入100μL染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞，室温避光孵育15-45min分钟。
（4）吸弃染料工作液，使用培养液清洗盖玻片2~3次，每次5分钟。
4、使用荧光显微镜或流式细胞仪进行观察。MitoMark Green I的最大激发/发射波长490/512 nm。注意事项：
1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1]. Gautam N, et, al. A high content imaging flow cytometry approach to study mitochondria in T cells: MitoTracker Green FM dye concentration optimization. Methods. 2018 Feb 1;134-135:11-19.
Green fluorescent mitochondrial stain. Localizes to mitochondria regardless of mitochondrial membrane potential. Excitation/emission maxima λ ~ 490/516 nm.
Garner et al (1997) Fluorometric assessments of mitochondrial function and viability in cryopreserved bovine spermatozoa. Biol.Reprod. 57 1401 PMID:9408246
| Cas No. | 201860-17-5 | SDF | |
| Canonical SMILES | ClC1=CC2=C([N+](CC3=CC=C(CCl)C=C3)=C(/C=C/C=C4N(C)C5=CC=CC=C5O\4)N2CC6=CC=C(CCl)C=C6)C=C1Cl.[Cl-] | ||
| 分子式 | C34H28Cl5N3O | 分子量 | 671.87 |
| 溶解度 | Soluble in DMSO | 储存条件 | Store at -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.4884 mL | 7.4419 mL | 14.8838 mL |
| 5 mM | 0.2977 mL | 1.4884 mL | 2.9768 mL |
| 10 mM | 0.1488 mL | 0.7442 mL | 1.4884 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。