Mito-FerroGreen

本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。

1.制备染色液

(1)配置储存液: 向含有50μg Mito-FerroGreen的管子中添加53μl无水DMSO，用移液器吹打混匀，制成浓度为1mM的Mito-FerroGreen储存液。

(2)配置工作液: 使用无血清培养基或HBSS缓冲液稀释Mito-FerroGreen储存液，配置浓度为5μM的Mito-FerroGreen工作液。

注意:

①  1 mM的Mito-FerroGreen储存液和5μM的Mito-FerroGreen工作液都不能长期保存，建议现配现用；

②  由于Mito-FerroGreen的降解会增加背景荧光，如果不能一次用完，剩余的Mito-FerroGreen 储存液和工作液不建议继续使用；

③  可以用乙醇代替DMSO，用乙醇配制的工作液在-20℃可稳定保存2周；

④  配置工作液时不要使用含血清的培养基，血清会造成染色背景过高。

2.细胞染色

(1)在培养皿/共聚皿/无菌盖玻片上接种细胞后，37℃、5% CO₂培养箱中培养过夜或培养至细胞完全贴壁；

(2)去除培养基后，用无血清培养基或HBSS缓冲液清洗细胞3次；

(3)加入浓度为5μM的Mito-FerroGreen工作液，37℃、5%CO₂条件下孵育30min；

(4)去除上清液，用无血清培养基或HBSS缓冲液清洗细胞3次。

(5)（可选，阳性对照组）加入含有激活剂(如Erastin、RSL3)的培养基，在37℃，5% CO₂培养箱中培养养1h；

注意：

①  具体培养时间请根据实验条件自行优化；

②  步骤（3）和步骤（5）的顺序可以根据具体实验条件改变。

3.在荧光显微镜下观察细胞，Mito-FerroGreen的最大吸收光/发射光波长为505/535nm。

注意事项：

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。