LysoTracker Green DND-26
(Synonyms: 溶酶体绿色荧光探针) 目录号 : GC20116LysoTracker Green DND-26是一种绿色荧光标记的溶酶体探针，最大激发/发射波长为504nm/511nm。
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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LysoTracker Green DND-26 is an acidotropic green fluorescent probe that can be used to label and track lysosomes in living cells, with maximum excitation/emission wavelengths of 504nm/511nm[1]. LysoTracker probes contain a fluorescein linked to a weak base, which is partially protonated at neutral pH and can freely penetrate the cell membrane. They are typically accumulated in spherical organelles[2]. Studies on the endocytosis kinetics of LysoTracker probes have shown that the rate of dye uptake into living cells is only a few seconds. However, long-term incubation of these lysosomal probes will induce an increase in lysosomal pH. It is recommended to incubate cells with the probe for only 1-5min before imaging[3]. LysoTracker Green DND-26 can selectively accumulate in the lamellar bodies of alveolar type II (AT2) cells[4]. LysoTracker Green DND-26 can be used to observe the co-localization of SPHK1-TagRFP with lysosomes[5]. Colocalization of LysoTracker Green DND-26 and TMR-Dextran enables monitoring of macropinosome internalization in lysosomes[6].
References:
[1] Dash B S, Lu Y J, Pejrprim P, et al. Hyaluronic acid-modified, IR780-conjugated and doxorubicin-loaded reduced graphene oxide for targeted cancer chemo/photothermal/photodynamic therapy[J]. Biomaterials advances, 2022, 136: 212764.
[2] Barral D C, Staiano L, Guimas Almeida C, et al. Current methods to analyze lysosome morphology, positioning, motility and function[J]. Traffic, 2022, 23(5): 238-269.
[3] Chen X, Bi Y, Wang T, et al. Lysosomal targeting with stable and sensitive fluorescent probes (Superior LysoProbes): applications for lysosome labeling and tracking during apoptosis[J]. Scientific reports, 2015, 5(1): 9004.
[4] Van der Velden J L, Bertoncello I, McQualter J L. LysoTracker is a marker of differentiated alveolar type II cells[J]. Respiratory research, 2013, 14: 1-7.
[5] Moruno Manchon J F, Uzor N E, Finkbeiner S, et al. SPHK1/sphingosine kinase 1-mediated autophagy differs between neurons and SH-SY5Y neuroblastoma cells[J]. Autophagy, 2016, 12(8): 1418-1424.
[6] Mishra R, Bhowmick N A. Visualization of macropinocytosis in prostate fibroblasts[J]. Bio-protocol, 2019, 9(10): e3235-e3235.
LysoTracker Green DND-26是一种绿色荧光标记的溶酶体探针，最大激发/发射波长为504nm/511nm[1]。LysoTracker Green DND-26是一种细胞渗透性探针，由于其弱碱性，选择性地聚集在酸性区室（如溶酶体）中，一旦进入溶酶体，它就会质子化并被捕获，发出明亮的绿色荧光[2]。LysoTracker Green DND-26能够选择性地聚集在肺泡II型（AT2）细胞的层状体中[3]。LysoTracker Green DND-26能够用于观察SPHK1-TagRFP与溶酶体的共定位情况[4]。LysoTracker Green DND-26与TMR-Dextran的共定位能够监测溶酶体中大胞饮体的内化[5]。
本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1. 溶液配制
（1）工作液：用生长培养基或合适的缓冲液稀释LysoTracker Green DND-26母液到所需的工作浓度。对于LysoTracker系列溶酶体探针，推荐工作液浓度为50-75nM。
注意：为了降低探针加载过度可能引起的假阳性，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。工作液必须现配现用。
2. 染色步骤（贴壁细胞）
（1）将细胞置于培养皿中的盖玻片上，加入合适培养基，使其爬片生长。
（2）待细胞生长到合适密度，吸除培养液，加入适量37℃预热的含LysoTracker Green DND-26培养基（必须完全覆盖住细胞），在适合特定细胞类型的生长条件下孵育细胞30min-2h（具体孵育时间需根据细胞类型而定）。
（3）利用不含LysoTracker Green DND-26的新鲜培养基替换上述染色液，用荧光显微镜进行观察。若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间，使得染料能聚集在溶酶体上。
注意：若细胞在染色后于不含探针的培养基中孵育，会观察到荧光信号的衰减和细胞的空泡化现象。
3.染色步骤（悬浮细胞）
（1）离心沉淀细胞，吸除上清。
（2）利用适量37°C预热的含LysoTracker Green DND-26培养基重悬细胞，在适合特定细胞类型的生长条件下孵育细胞30min-2h（具体孵育时间需根据细胞类型而定）
（3）离心，吸除染色液，加入新鲜培养基重悬细胞。
（4）用荧光显微镜进行观察。若染色不够充分，建议增加探针浓度或延长染色时间，使得探针能聚集在溶酶体上。
注意：另一种方法，悬浮细胞可能会粘附到经BD Cell-Tak处理的盖玻片上，此时，可用类似于贴壁细胞的方法进行染色。
| Cas No. | SDF | ||
| 别名 | 溶酶体绿色荧光探针 | ||
| 分子式 | C18H26BCIF2N4O | 分子量 | 398.69 |
| 溶解度 | 1mM in 50μL DMSO | 储存条件 | Store at -20°C,protect from light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.5082 mL | 12.5411 mL | 25.0821 mL |
| 5 mM | 0.5016 mL | 2.5082 mL | 5.0164 mL |
| 10 mM | 0.2508 mL | 1.2541 mL | 2.5082 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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