LysoSensor PDMPO
目录号 : GC26349PDMPO是一种亲酸性溶酶体荧光探针和细胞内pH指示剂，能够用于荧光成像。
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00%
- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1、制备PDMPO染色液
（1）染料储存液: 使用DMSO将PDMPO溶解成1 mM的储存液。
注意:未使用的储存液分装后-20℃避光保存，避免反复冻融。
（2）工作液制备:用合适的无菌缓冲液(如:无血清培养基或PBS)稀释储存液，推荐工作液浓度至少为1 µM。
注意:
①请根据实际情况调整工作液浓度，现用现配；
②为了减少背景过高或过载产生的假阳性现象，染料的浓度应尽可能低；
③若细胞在染色后在不含染料的缓冲液中孵育，会观察到荧光信号的衰减和细胞的空泡化现象。
2、细胞悬浮染色
（1）悬浮细胞：悬浮细胞经4°C、1000g离心3-5分钟，弃去上清液，使用PBS清洗两次，每次5分钟。
（2）贴壁细胞：使用PBS清洗两次，加入胰酶消化细胞，消化完成后经1000g离心3-5min。
（3）使用0.5-1mL 37℃预热的工作液重悬约106个细胞，培养箱中避光孵育0.5-2h。不同细胞最佳孵育时间不同，请根据具体实验需求自行摸索。
（4）孵育结束后，经1000g离心5分钟，去除上清液，加入PBS清洗2-3次，每次5分钟。
（5）使用预热的无血清细胞培养基或PBS重悬细胞，通过荧光显微镜或流式细胞术观察。
3、细胞贴壁染色
（1）在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。
（2）从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中。
（3）从盖玻片的一角加入100uL 37℃预热的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
（4）培养箱中避光孵育0.5-2h。不同细胞最佳孵育时间不同，请根据具体实验需求自行摸索。
（5）孵育结束后吸弃染料工作液，使用预热的培养液洗盖玻片2~3次。
4、荧光检测：PDMPO具有pH依赖性双激发和双发射光谱峰，在中性环境中产生蓝色荧光（Ex/Em=329nm/440nm），在偏酸溶液中产生黄色荧光（Ex/Em=384nm/540nm）。
注意事项：
①对Lyso-Tracker探针的内化进行动力学研究发现，活细胞摄取此探针的速率在几秒之内即可完成，但该探针展示出溶酶体“碱化效应”，长时间孵育会导致溶酶体pH上升，因此，当此探针于37℃孵育细胞1-5min才是有用的pH指示剂；
②若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间，使得染料能聚集在溶酶体上；
③荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭；
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
LysoSensor Yellow/Blue DND-160 (LysoSensor PDMPO, PDMPO) is an acidophilic probe that accumulates in acidic lysosomes after protonation and is commonly used as a ratiometric marker of lysosomal pH (pK a is approximately 4.2). In addition to labeling acidic organelles, PDMPO has the added advantage of tracking pH fluctuations. PDMPO has pH-dependent dual excitation and dual emission spectrum peaks, producing blue fluorescence (Ex/Em=329nm/440nm) in a neutral environment and yellow fluorescence (Ex/Em=384nm/540nm). In addition, PDMPO has high fluorescence stability, which is beneficial for image-based assays [1].
References:
[1].L V Albrecht, N Tejeda-Muñoz, E M De Robertis. Protocol for Probing Regulated Lysosomal Activity and Function in Living Cells. 2020 Oct 17;1(3):100132. doi: 10.1016/j.xpro.2020.100132. eCollection 2020 Dec 18.
LysoSensor Yellow/Blue DND-160（LysoSensor PDMPO，PDMPO）是一种亲酸探针，质子化后在酸性溶酶体中积累，常用作溶酶体pH的比率标记物（pK a 约4.2）。除标记酸性细胞器外，PDMPO具有跟踪pH波动的额外优势。PDMPO具有pH依赖性双激发和双发射光谱峰，在中性环境中产生蓝色荧光（Ex/Em=329 nm/440 nm），在偏酸溶液中产生黄色荧光（Ex/Em=384 nm/540 nm）。此外，PDMPO具有高荧光稳定性，有利于基于图像的测定[1]。
| Cas No. | SDF | ||
| 分子式 | C20H22N4O3 | 分子量 | 366.41 |
| 溶解度 | 储存条件 | ||
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.7292 mL | 13.6459 mL | 27.2918 mL |
| 5 mM | 0.5458 mL | 2.7292 mL | 5.4584 mL |
| 10 mM | 0.2729 mL | 1.3646 mL | 2.7292 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。