Liperfluo

本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。

1、制备染色液

（1）染料储存液：使用前对管子进行离心，将粉末集中在管底。建议在DMSO中溶解粉末，配置浓度为10mM的储存液。配置好的储存液分装后于-20℃或-80℃密封储存，防潮避光。

（2）染料工作液：使用合适的缓冲液(如HBSS)稀释储存液，配制浓度为10μM的Liperfluo工作液。请根据实际情况调整及优化工作液浓度，现用现配。

2、细胞悬浮染色(以6孔板为例)

（1）悬浮细胞经1000g离心3-5min。弃去上清液，使用HBSS清洗两次，每次5分钟。

（2）贴壁细胞使用HBSS清洗两次，加入胰酶消化细胞，消化完成后经1000g离心3-5min，弃去上清液。

（3）加入1mL染料工作液重悬细胞，37℃避光孵育30min分钟。不同细胞最佳孵育时间不同，请根据实际情况进行调整。

（4）孵育结束后，经1000g离心5分钟，去除上清液，加入HBSS清洗2-3次，每次5分钟。

（5）使用HBSS重悬细胞，通过荧光显微镜或流式细胞仪进行观察。

3、细胞贴壁染色

（1）在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。

（2）从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中。

（3）从盖玻片的一角加入100μL染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞，37℃避光孵育30min分钟。不同细胞最佳培养时间不同，请根据实际情况进行调整。

（4）吸弃染料工作液，使用HBSS清洗盖玻片2~3次，每次5分钟。

4、使用荧光显微镜或流式细胞仪进行观察，Liperfluo的最大激发光/发射波长为524/535nm。

注意事项：

① 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭；

② 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。