IRDye 700DX
目录号 : GC71797IRDye 700DX是一种近红外（NIR）光敏染料，最大吸收波长为689nm，最大发射波长为702nm。
Cas No.:916821-46-0
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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IRDye 700DX is a near-infrared (NIR) photosensitive dye with a maximum absorption wavelength of 689nm and an emission maximum of 702nm[1]. The IRDye 700DX-antibody conjugates selectively accumulate within the target tumor and exhibit phototoxicity by binding to target cells, with minimal toxicity to normal tissues[2]. IRDye 700DX-antibody conjugates accumulating in a perivascular region in a tumor can destroy the corresponding tissue and increase the vascular permeability in the tumor [3]. IRDye 700DX has been widely used in combination with monoclonal antibodies to develop novel photoimmunotherapy to kill cancer cells[4].
References:
[1] Tynan C J, Clarke D T, Coles B C, et al. Multicolour single molecule imaging in cells with near infra-red dyes[J]. PloS one, 2012, 7(4): e36265.
[2] Kishimoto S, Bernardo M, Saito K, et al. Evaluation of oxygen dependence on in vitro and in vivo cytotoxicity of photoimmunotherapy using IR-700–antibody conjugates[J]. Free Radical Biology and Medicine, 2015, 85: 24-32.
[3] Dou X, Nomoto T, Takemoto H, et al. Effect of multiple cyclic RGD peptides on tumor accumulation and intratumoral distribution of IRDye 700DX-conjugated polymers[J]. Scientific Reports, 2018, 8(1): 8126.
[4] Nomoto T, Dou X. IRDye 700DX-conjugated polymers inducing photochemical internalization[J]. Photodiagnosis and Photodynamic Therapy, 2024, 46: 104166.
IRDye 700DX是一种近红外（NIR）光敏染料，最大吸收波长为689nm，最大发射波长为702nm[1]。IRDye 700DX与抗体形成的偶联物（IRDye 700DX-antibody conjugates）可选择性富集于靶向肿瘤内，通过结合靶细胞产生光毒性，且对正常组织毒性极低[2]。IRDye 700DX-antibody偶联物在肿瘤血管周围区域积累的偶联物能破坏相应组织并增加肿瘤血管通透性[3]。IRDye 700DX已广泛应用于与单克隆抗体结合开发新型光免疫疗法以杀伤癌细胞[4]。
基于IRDye 700dx的细胞单分子成像
本方案来自文献，请根据您的具体需求进行修改。
1. IRDye 700dx -生物素-转铁蛋白结合物的制备：
(1)生物素-转铁蛋白溶于0.1M NaHCO3 pH 8.3中，终浓度为1mg/ml。
(2)以1∶3的摩尔比加入IRDye 700DX和NHS (DMSO 10mg/mL，终体积≤5%)，室温避光60min。
(3)采用PD-10脱盐柱去除游离染料，收集第一峰。测量A280/A689，计算标记度1.5-2.5染料/蛋白质为首选。
(4)样品在-80℃避光保存，避免反复冻融。
2. 单分子锚定在滑块表面（用于系统校正）：
(1)将新盘子洗涤30min，纯水漂洗，氮气吹干。
(2)加入1mg/ml BSA-生物素，室温下静置10min。
(3)用TE缓冲液洗涤3次，0.2mg/ml链霉亲和素作用10min。
(4)轻轻洗涤，加入0.05nM IRDye 700DX-biotin-transferrin（TE稀释），室温保存10min。
(5)用TE缓冲液洗去游离结合物，立即用于成像，或在4℃避光保存≤2 h。
3. 细胞样本的单分子标志物：
(1) MCF-7细胞在35mm玻璃底培养皿中生长至30-40%融合（密度过高会增加背景）。
(2)将转铁蛋白受体转换为无血清RPMI 1640，在37℃孵育18h以上。
(3)4℃预冷并在4℃下添加0.05nM IRDye 700DX-biotin-转铁蛋白（0.1nM总生物素-转铁蛋白，含有50倍未标记的生物素-转铁蛋白作为竞争稀释，确保单分子结合）1h。
(4)用冷PBS洗涤3次；在室温下用4% PFA固定细胞10min。
(5)用缓冲液替换，立即放在机器上，或置于4℃避光保存≤4小时。
4. 单分子成像采集：
(1)优化TIRF角度，照射深度为100~150nm。激光功率1-2W/cm2（入射功率≈3-5mW）。
(2) EMCCD增益300，曝光50~100ms，连续采集1000~3000帧（10Hz）。
(3)记录695nm和780nm远红通道（用于背景减影和混合色膨胀）。
(4)每批实验中加入1个“无染料”空白皿，设阈值时以空白+ 5σ的平均值作为检测下限。
5. 预防措施
(1)暗操作：IRDye 700DX对光敏感，所有操作均应在暗条件下进行。
(2)激光安全：690nm激光对眼睛有潜在伤害，操作时应佩戴护目镜。
(3)染料比例控制：染料结合过多会影响抗体活性。推荐每抗体结合2-4个染料。
(4)细胞状态监测：观察光照前后细胞形态变化，避免过度光照造成的非特异性杀伤。
References:
[1] Tynan C J, Clarke D T, Coles B C, et al. Multicolour single molecule imaging in cells with near infra-red dyes[J]. PloS one, 2012, 7(4): e36265.
| Cas No. | 916821-46-0 | SDF | |
| 分子式 | C74H96N12Na4O27S6Si3 | 分子量 | 1954.22 |
| 溶解度 | 储存条件 | -20°C, sealed storage, away from moisture and light | |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 511.7 μL | 2.5586 mL | 5.1171 mL |
| 5 mM | 102.3 μL | 511.7 μL | 1.0234 mL |
| 10 mM | 51.2 μL | 255.9 μL | 511.7 μL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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- SDS (Safety Data Sheet)
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