Golgi-Tracker Red

本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。

1.制备染色液

(1) 本产品以33.3mg/ml（~47mM）的DMSO溶液形式提供，建议首次使用时，经低速离心将产品集中在底部，按照单次用量分装成小规格，在-20℃或-80°C避光保存，避免反复冻融。

(2) 配置工作液:使用合适的缓冲液(如PBS) 按照1:100的比例稀释储存液，混匀后即为工作液。

注意:

①  请根据实际情况调整工作液浓度，现用现配；

②  Golgi-Tracker Red的工作浓度可以根据实际情况进行适当调整，推荐的稀释比例范围为1:50~1:200。

2.细胞悬浮染色

(1) 悬浮细胞：经1000g离心3-5分钟，弃去上清液，使用适量的溶液如Hanks平衡盐溶液(含钙镁)或其他缓冲液清洗两次，每次5分钟。

(2) 贴壁细胞：使用合适的缓冲液清洗两次，加入胰酶消化细胞，消化完成后经1000g离心3-5min。

(3) 使用新鲜配制的Golgi-Tracker Red染色工作液重悬细胞，4℃避光孵育30min。

(4) 吸弃染色液，使用预冷的细胞培养液洗涤细胞3次左右，换新鲜培养液在37℃的条件下避光孵育30min。，

(5) 使用新鲜培养液再洗涤一次，随后通过荧光显微镜或共聚焦显微镜进行观察。

3.细胞贴壁染色

(1) 在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。

(2) 从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中。

(3) 去除细胞培养液，用适量的溶液如Hanks平衡盐溶液(含钙镁)或其他缓冲液来洗涤生长在盖玻片上的细胞。

(4) 吸弃漂洗液，加入新鲜配制的Golgi-Tracker Red染色工作液，4℃避光孵育30min。

(5) 吸弃染色液，使用预冷的细胞培养液洗涤细胞3次左右，换新鲜培养液在37℃的条件下避光孵育30min。

(6) 使用新鲜培养液再洗涤一次，随后通过荧光显微镜或共聚焦显微镜进行观察。

4.显微镜检测：染色完成后，高尔基体呈明亮的强荧光染色，而细胞内的其他膜系统呈比较微弱的荧光染色。Golgi-Tracker Red的最大激发/发射光分别为589 /617 nm。

注意事项：

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。