2,6-Diaminopimelic acid
(Synonyms: 2,6-二氨基庚二酸) 目录号 : GA20387
2,6-Diaminopimelic acid是一种对称的α,α′-二氨基二羧酸,存在于细菌和高等植物中。
Cas No.:583-93-7
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
2,6-Diaminopimelic acid is a symmetrical α, α′-diamino dicarboxylic acid found in bacteria and higher plants [1]. 2,6-Diaminopimelic acid is a precursor for the biosynthesis of L-lysine and an important component of bacterial peptidoglycan [2]. 2,6-Diaminopimelic acid is a part of the bacteria that changes the bacteria (as a germ of bacteria). Presence or absence of 2,6-Diaminopimelic acid in the cell wall, classification of staphylococcal bacteria (containing 2,6-Diaminopimelic acid) and staphylococcal bacteria (containing staphylococcus acid) [3-4].
References:
[1]. Dzierzbicka K. Synthesis of 2, 6-diaminopimelic acid (DAP) and its analogues. Polish Journal of Chemistry. 2007; 81: 455-473.
[2]. Shaikh MS, Kale MA, Sharuk K. Discovery of Heterocyclic Analogs of Diaminopimelic Acid as Promising Antibacterial Agents Through Enzyme Targeted Inhibition of Lysine Biosynthesis. Current Enzyme Inhibition. 2018 Aug 1; 14(2): 120-130.
[3]. Masson HA, Denholm AM, Ling JR. In vivo metabolism of 2, 2'-diaminopimelic acid from gram-positive and gram-negative bacterial cells by ruminal microorganisms and ruminants and its use as a marker of bacterial biomass. Applied and environmental microbiology. 1991 Jun; 57(6): 1714-1720.
[4]. Bhamidi S, Shi L, Chatterjee D, et al. A bioanalytical method to determine the cell wall composition of Mycobacterium tuberculosis grown in vivo. Analytical biochemistry. 2012 Feb 1; 421(1): 240-249.
2,6-Diaminopimelic acid是一种对称的α,α′-二氨基二羧酸,存在于细菌和高等植物中 [1]。2,6-Diaminopimelic acid是L-lysine生物合成的前体,也是细菌肽聚糖的重要组成部分 [2]。2,6-Diaminopimelic acid是细菌的一部分,它能改变细菌(作为细菌的胚芽)。细胞壁中是否存在2,6-Diaminopimelic acid,可以区分葡萄球菌(含2,6-Diaminopimelic acid)和葡萄球菌(含葡萄球菌酸) [3-4]。
本方案用于区分含2,6-Diaminopimelic acid (DAP)的葡萄球菌和含磷壁酸的葡萄球菌 [1-2]。本方案仅供实验参考,实际应用需根据您的需求进行修改。
1. 试剂和材料准备
待测葡萄球菌纯培养物;DAP 标准溶液(1mg/mL,溶于0.1M HCl);磷壁酸标准品(或已知含磷壁酸的阳性对照菌株,例如金黄色葡萄球菌);6M盐酸(HCl),10% 三氯乙酸(TCA);茚三酮比色液;磷钼酸染色液。
2. 实验步骤
细菌细胞壁提取与水解:
(1)菌体收集:
将待测菌株接种于TSB液体培养基中,37℃培养18-24小时。离心(8000rpm,10分钟)收集菌体,PBS洗涤3次。冻干菌体或直接进行下一步水解。
(2)酸水解(DAP释放):
取50mg湿菌体,加入1mL 6M HCl,110℃水解16-18小时。冷却后,离心(12000rpm,5分钟),收集上清液,用0.22μm滤膜过滤。
(3)TCA处理(提取葡萄球菌酸):
另取50mg湿菌体,加入1mL 10% TCA溶液,100℃煮沸30分钟。离心后取上清液备用。
薄层色谱(TLC)检测:
(1)DAP检测:
点样:将酸水解物和DAP标准品点于薄层色谱板(硅胶G层)上。
展开剂:正丁醇:冰醋酸:水=4:1:1(v/v)。
显色:喷入茚三酮溶液,110℃烘烤5分钟,可见紫色斑点(DAP的Rf值约为0.3)。
(2)葡萄球菌酸检测:
点样:将TCA提取物和阳性对照点于另一薄层色谱板。
展开剂:氯仿:甲醇:水=65:25:4(v/v)。
显色:喷入磷钼酸染色液,105℃烘烤10分钟,蓝色斑点表示磷酸基团的存在。
结果判断:
(1)含DAP的葡萄球菌:薄层色谱(TLC)显色后,酸水解样品与DAP标准斑点位置一致(茚三酮显紫色),葡萄球菌酸解试验阴性。
(2)含葡萄球菌酸解的葡萄球菌:TCA提取物显蓝色斑点(磷钼酸染色阳性),DAP试验阴性。
注意事项:
(1)DAP酸解需要严格控制温度(110℃±2℃),以避免过度降解。提取葡萄球菌酸解时,TCA处理时间过长可能会破坏磷酸基团。
(2)建议结合革兰氏染色(确认细菌形态)和生化鉴定(如过氧化氢酶试验)进行辅助鉴别。
(3)若薄层色谱(TLC)信号较弱,可采用高效液相色谱(HPLC)或质谱(LC-MS)进行定量分析。
(4)盐酸和三氯乙酸具有腐蚀性,操作时必须佩戴手套和护目镜。
References:
[1]. Masson HA, Denholm AM, Ling JR. In vivo metabolism of 2, 2'-diaminopimelic acid from gram-positive and gram-negative bacterial cells by ruminal microorganisms and ruminants and its use as a marker of bacterial biomass. Applied and environmental microbiology. 1991 Jun; 57(6): 1714-1720.
[2]. Bhamidi S, Shi L, Chatterjee D, et al. A bioanalytical method to determine the cell wall composition of Mycobacterium tuberculosis grown in vivo. Analytical biochemistry. 2012 Feb 1; 421(1): 240-249.
Cas No. | 583-93-7 | SDF | |
别名 | 2,6-二氨基庚二酸 | ||
分子式 | C7H14N2O4 | 分子量 | 190.2 |
溶解度 | H2O : 10.42 mg/mL (54.78 mM; ultrasonic and warming and heat to 60°C) | 储存条件 | Store at -20°C |
General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液;一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限:-80°C 储存时,请在 6 个月内使用,-20°C 储存时,请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度,请将管子加热至37℃,然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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Shipping Condition | 评估样品解决方案:配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸:配备RT,或根据请求配备蓝冰。 |
制备储备液 | |||
![]() |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
1 mM | 5.2576 mL | 26.2881 mL | 52.5762 mL |
5 mM | 1.0515 mL | 5.2576 mL | 10.5152 mL |
10 mM | 0.5258 mL | 2.6288 mL | 5.2576 mL |
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量) | ||||||||||
给药剂量 | mg/kg | 动物平均体重 | g | 每只动物给药体积 | ul | 动物数量 | 只 | |||
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶于水的药物;不同批次药物配方比例不同,请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方) | ||||||||||
% DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
计算重置 |
计算结果:
工作液浓度: mg/ml;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL,
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL saline,混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的;
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入,进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液,可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
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