Fluorescein di-β-D-glucuronide
(Synonyms: 荧光素二(BETA-D-吡喃半乳糖苷),FDG,FDGlcU,Fluorescein di(β-D-galactopyranoside)) 目录号 : GC33589
Fluorescein di-β-D-glucuronide是一种荧光底物，激发波长488nm，发射波长530nm，广泛用于流式细胞术检测单细胞和微菌落中的β-半乳糖苷酶活性。
Cas No.:17817-20-8
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Fluorescein di-β-D-glucuronide is a fluorogenic substrate with an excitation wavelength of 488nm and an emission wavelength of 530nM, which is widely used to detect β-galactosidase activity in single cells and microcolonies via flow cytometry[1][2]. Fluorescein di-β-D-glucuronide is hydrolyzed by β-galactosidase in a two step process, first to fluorescein-mono-β-D-galactopyranoside (FMG), which is slightly fluorescent, and then to highly fluorescent fluorescein[3].
In vitro, Fluorescein di-β-D-glucuronide(182µM) is used to incubate to formaldehyde-fixed Hs68 human foreskin fibroblasts for 24h at 37°C in the dark without CO₂. Fluorescein di-β-D-glucuronide was able to enter cells, causing fluorescence emission proportional to the amount of β-galactosidase[4].
References:
[1] Nir R, Yisraeli Y, Lamed R, Sahar E. Flow cytometry sorting of viable bacteria and yeasts according to beta-galactosidase activity. Appl Environ Microbiol. 1990 Dec;56(12):3861-6.
[2] Plovins A, Alvarez A M, Ibañez M, Molina M, Nombela C. Use of fluorescein-di-beta-D-galactopyranoside (FDG) and C12-FDG as substrates for beta-galactosidase detection by flow cytometry in animal, bacterial, and yeast cells.Appl Environ Microbiol. 1994 Dec;60(12):4638-41.
[3] Hofmann J, Sernetz M. A kinetic study on the enzymatic hydrolysis of fluorescein diacetate and fluorescein-di-beta-D-galactopyranoside. Anal Biochem. 1983 May;131(1):180-6.
[4] Yang N C, Hu M L. A fluorimetric method using fluorescein di-beta-D-galactopyranoside for quantifying the senescence-associated beta-galactosidase activity in human foreskin fibroblast Hs68 cells. Anal Biochem. 2004 Feb 15;325(2):337-43.
Fluorescein di-β-D-glucuronide是一种荧光底物，激发波长488nm，发射波长530nm，广泛用于流式细胞术检测单细胞和微菌落中的β-半乳糖苷酶活性[1][2]。Fluorescein di-β-D-glucuronide被β-半乳糖苷酶两步水解：先生成弱荧光的fluorescein-mono-β-D-galactopyranoside（FMG），再生成高荧光强度的荧光素[3]。
体外实验中，将182µM Fluorescein di-β-D-glucuronide与经甲醛固定的Hs68人包皮成纤维细胞在37°C、避光、无CO₂条件下孵育24h。Fluorescein di-β-D-glucuronide可进入细胞，其荧光强度与β-半乳糖苷酶含量成正比[4]。
Fluorescein di-β-D-glucuronide定量β-半乳糖苷酶活性[1]：
1.将5mg Fluorescein di-β-D-glucuronide溶于38µL H2O:DMSO（1:1），稀释至200mM，–20°C保存。
2.使用前，将储备液用无菌H2O稀释100倍，置于37°C水浴10min使其完全溶解。
3.现配染色液：混合3.7mL的0.2M柠檬酸、6.3mL的0.4M Na2HPO4 、1mL的100mM铁氰化钾、1mL的100mM亚铁氰化钾、 0.6mL的5M NaCl、0.2mL的0.2M MgCl2 和6.2mL离子水。
4.将人包皮成纤维细胞Hs68按5×103细胞/孔接种96孔板，过夜贴壁。
5.PBS洗2次，用2%甲醛+0.2%戊二醛（PBS缓冲剂）固定5min。
6.PBS洗3次，每孔加100μL染色缓冲液，再加10μL 2mM Fluorescein di-β-D-glucuronide，Fluorescein di-β-D-glucuronide的终浓度182μM。
7.在37°C、避光、无CO₂条件下孵育24h。
8.孵育后，每孔取100μL上清移至新96孔板，用荧光仪（Ex 485nm/Em 535nm）三次重复测荧光强度。
本协议仅提供了一个指南，应根据您的具体需要进行修改。
References:
[1] Yang N C, Hu M L. A fluorimetric method using fluorescein di-beta-D-galactopyranoside for quantifying the senescence-associated beta-galactosidase activity in human foreskin fibroblast Hs68 cells. Anal Biochem. 2004 Feb 15;325(2):337-43.
| Cas No. | 17817-20-8 | SDF | |
| 别名 | 荧光素二(BETA-D-吡喃半乳糖苷),FDG,FDGlcU,Fluorescein di(β-D-galactopyranoside) | ||
| Canonical SMILES | O=C1OC2(C(C=CC(O[C@@H]([C@@H]([C@@H](O)[C@H]3O)O)O[C@@H]3CO)=C4)=C4OC5=CC(O[C@@H]([C@@H]([C@@H](O)[C@H]6O)O)O[C@@H]6CO)=CC=C25)C7=C1C=CC=C7 | ||
| 分子式 | C32H32O15 | 分子量 | 656.59 |
| 溶解度 | DMSO : 5.56 mg/mL (8.47 mM; ultrasonic and warming and heat to 60°C) | 储存条件 | Store at -20°C, protect from light,unstable in solution, ready to use. |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.523 mL | 7.6151 mL | 15.2302 mL |
| 5 mM | 304.6 μL | 1.523 mL | 3.046 mL |
| 10 mM | 152.3 μL | 761.5 μL | 1.523 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
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