Fluo-5N AM
(Synonyms: Fluo-5N, Acetoxymethyl Ester) 目录号 : GC26364Fluo-5N是Fluo-4的结构类似物，具更低的钙结合亲和力，使其非常适用于钙水平在1μM~1mM区间内的胞内钙离子检测，而Fluo-3和Fluo-4在这个区间内的钙离子反应达到饱和。
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
;)
,-1-7$$$37316672.jpg');)
;)
;)
$$$36806353.jpg');)
;33(7)%EF%BC%9A546-561$$$37156877.jpg');)
;)
;)
;)
%201124-1138.$$$35908550.jpg');)
%20766-780.$$$37100057.jpg');)
%20418-432.$$$36893736.jpg');)
%EF%BC%9A-240-255.$$$35108512.jpg');)
533-545$$$36543525.jpg');)
%201-13.$$$36600053.jpg');)
;)
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: ≥95.00%
- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
使用方法
A，试剂准备
1) 配制PluronicF-127母液:称取100mgPluronicF-127粉末(货号:MS4301-1G)中加入500μlDMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。
2) HHBS Buffer(1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer,pH 7.2)或者其他生理缓冲液 B，操作步骤
1) 用无水DMSO溶解Fluo-5NAM配制成2-5mM的储存液，或将已配好的Fluo-5NAM储存液取出于室温回温。(如:若配制成4mM的母液，需向50μg Fluo-5NA M中加入11ul无水DMSO)。准备Fluo-5NAM工作液之前，有时需要往Fluo-5NAM储存液中加入适量的20% Pluronic F-127溶液，以增强AM探针的水溶性。
[注①]:Fluo-5N AM染色工作液制备前，添加一定体积的20% Pluronic F-127溶液到Fluo-5NAM+DMSO储存液，从而使Pluronic F-127的最终工作浓度约为0.02%。
2)，用HHBS或其他生理缓冲液(含钙镁)将Fluo-5NAM+DMSO储存液稀释到1-20μM的工作液。
[注①]:Fluo-5N AM应用在大部分细胞的推荐加载浓度为4-5μM，具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。
3) [可选]如果细胞内(比如CHO细胞)含有机阴离子转运体，丙磺舒(Probenecid，1-2.5mM)或磺吡酮(Sulfinpyrazone,0.1-0.25mM)可能需要加入细胞培养基内，以降低去酯化探针的泄露水平。
4) 将准备好的Fluo-5NAM染色工作液加入细胞，加入量以覆盖细胞为准。室温或37℃孵育20-120min。
【注①]:若使用含血清的培养基，血清内酯酶会降解AM，从而降低Fluo-5NAM加载效果。而含酚红培养基会使本底值略偏高，建议加入染色工作液前，对细胞清洗2~3次。
5) 吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理缓冲液(如有必要，使用含转运体抑制剂如1mM丙磺舒的缓冲液)清洗细胞1~2次，以去除残留探针。
6) 室温再孵育30min以保证细胞内AM的完全去酯化。
7) 用合适的激发/发射波长来检测荧光
注意事项
1) 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2)乙酰氧基甲基酯(AM)易吸潮，冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。
3) Fluo-5NAM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可在20-25C温育片刻至全部融解后使用。
4)Fluo-5NAM第一次使用，建议储存液现配现用，分装成单次用量，严格做到≤-20℃密封干燥冻存，以防止受潮。为了保证良好的实验效果，尽量在短时间内使用。
5) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
Fluo-5N is a structural analogue of Fluo-4, with lower calcium binding affinity, making it highly suitable for calcium levels at 1 μ Detection of intracellular calcium ions within the M~1mM range, while the calcium ion reactions of Fluo-3 and Fluo-4 reach saturation within this range. Fluo-5N is compatible with the 488nm excitation of argon ion lasers, making it suitable for confocal microscopy, flow cytometry, fluorescence enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and other instruments. The excitation and emission wavelengths are 494 and 516 nm, respectively. Once combined with calcium ions, the fluorescence intensity increases by more than 100 times and wavelength migration is very minimal.
Fluo-5NAM is an acetyl methyl ester derivative of Fluo-5N, which has cell membrane permeability and can easily enter cells with simple cultivation.
| Cas No. | SDF | ||
| 别名 | Fluo-5N, Acetoxymethyl Ester | ||
| 分子式 | C50H47F2N3O25 | 分子量 | 1127.92 |
| 溶解度 | 5.64mg/mL in DMSO | 储存条件 | -20°C,Sealed storage, away from moisture and light. |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 0.8866 mL | 4.4329 mL | 8.8659 mL |
| 5 mM | 0.1773 mL | 0.8866 mL | 1.7732 mL |
| 10 mM | 0.0887 mL | 0.4433 mL | 0.8866 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。