D-Sorbitol-13C6
目录号 : GC71652D-Sorbitol-13C6是一种完全碳13标记的山梨醇，可用于代谢示踪和质谱分析。
Cas No.:121067-66-1
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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D-Sorbitol-13C6 is a fully carbon-13 labeled sorbitol for metabolic tracing and mass spectrometry analysis [1]. D-Sorbitol-13C6 is commonly used to study carbon flow, metabolic pathways and as an analytical internal standard [2-3].
References:
[1]. Dash RP, Srinivas NR, Babu RJ. Use of sorbitol as pharmaceutical excipient in the present day formulations–issues and challenges for drug absorption and bioavailability. Drug development and industrial pharmacy. 2019 Sep 2; 45(9): 1421-1429.
[2]. Scherling C, Ulrich K, Ewald D, et al. A metabolic signature of the beneficial interaction of the endophyte Paenibacillus sp. isolate and in vitro–grown poplar plants revealed by metabolomics. Molecular Plant-Microbe Interactions. 2009 Aug; 22(8): 1032-1037.
[3]. Kiani‐Pouya A, Roessner U, Jayasinghe NS, et al. Epidermal bladder cells confer salinity stress tolerance in the halophyte quinoa and Atriplex species. Plant, Cell & Environment. 2017 Sep;40(9): 1900-1915.
D-Sorbitol-13C6是一种完全碳13标记的山梨醇，可用于代谢示踪和质谱分析 [1]。D-Sorbitol-13C6常用于研究碳流、代谢途径，并可作为分析内标 [2-3]。
本方案描述了使用D-Sorbitol-13C6进行骨吸收破骨细胞中糖利用和转运代谢通量示踪的方法。实际应用条件可能需要根据细胞类型和示踪剂剂量进行优化 [1-2]。
1. 试剂和材料准备
D-Sorbitol-13C6，源自小鼠骨髓巨噬细胞（BMM）的成熟破骨细胞，M-CSF（30ng/mL），RANKL（50ng/mL），添加10%透析FBS的无葡萄糖α-MEM培养基，采用合适的内标进行液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）。
2. 实验步骤
(1) 破骨细胞分化
分离小鼠BMM，并在添加M-CSF和RANKL的α-MEM培养基中分化5天，直至形成成熟的破骨细胞（TRAP+多核细胞）。标记前6-12小时更换为无糖培养基，以减少背景未标记碳池。
（2）示踪剂处理
在含10%透析FBS的无糖α-MEM培养基中制备1-5mM D-Sorbitol-13C6。将示踪剂培养基（每孔500µL-1mL）加入孔中，并在37℃、5% CO2条件下孵育细胞1-4小时，具体时间取决于所需的通量分辨率。
（3）代谢物提取
用冷PBS快速清洗细胞。加入预冷至-80℃的80%冷甲醇终止代谢。刮取细胞，将裂解物转移至微量离心管中。14,000rpm，4℃，离心10分钟。收集上清液进行LC-MS/MS分析。
(4) 液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）分析
使用负电喷雾电离（ESI）模式下的三重四极杆LC-MS/MS分析标记代谢物。监测13C标记和未标记糖（例如葡萄糖、果糖、山梨糖醇、G6P）的跃迁。定量内源性D-山梨糖醇时，使用D-Sorbitol-13C6作为内标进行标准化。如有需要，可根据蛋白质含量或细胞数量进行标准化。
注意事项
（1）示踪剂剂量优化：高浓度山梨糖醇可能会影响渗透平衡——应进行滴定以确定无毒剂量。
（2）时间进程设计：对于动态通量分析，在多个时间点（例如0、1、2、4小时）采集样品。
（3）质谱重叠：确保标记和未标记形式能够实现基线分辨。
（4）对照：包括未标记的D-山梨糖醇对照和用于背景校正的“无示踪剂”空白对照。
（5）下游成像：与LysoTracker或LAMP2共染色有助于定位标记的糖池。
（6）储存：样品储存于-80℃直至分析，以防止降解。
References:
[1]. Ribet A, Ng PY, Guo Q, et al. Sugar Transporter Slc37a2 Regulates Bone Metabolism Via a Dynamic Tubular Lysosomal Network in Osteoclasts. Journal of Bone and Mineral Research. 2023 Feb 1; 38: 72.
[2]. Wang L, Stanfill S, Valentin-Blasini L, et al. LC-MS/MS analysis of sugars, alditols, and humectants in smokeless tobacco products. Beitr Tab Int. 2019 Jun 13;28(5): 203-213.
| Cas No. | 121067-66-1 | SDF | |
| 分子式 | 13C6H14O6 | 分子量 | 188.13 |
| 溶解度 | H2O : 250 mg/mL (1328.87 mM; Need ultrasonic) | 储存条件 | -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 5.3155 mL | 26.5774 mL | 53.1547 mL |
| 5 mM | 1.0631 mL | 5.3155 mL | 10.6309 mL |
| 10 mM | 531.5 μL | 2.6577 mL | 5.3155 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
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