Cal-590 AM,Cell Permeant

注意事项
1) 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭
2) 乙氧基甲基(AM)易吸潮，冰取出后请在干的环境放至室温后再开封。由于试剂微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉未落入答底。
3) Cal-590 ,AM在4°c、冰浴等较低温度情况下会凝固而在离心管管底、管壁或管盖内，可在20-25温育片刻至全部融解后使用。
4) Cal-590 ,AM第一次使用，建议储存液现配现用，分装成单次用量，严格做到≥-20°c密封干爆东存，以防上受期，为了保证良好的实验效案，尽量在短时间内使用。
5) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法:
A，试剂准备
1)配制Pluronic F-127母液:称取100mg Pluronic F-127粉末货号,中加入500ul DMSO,配制成20(w/V) DMS母液，溶解过程需要在40-50°C加热20-30min。溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。
2) HHBS Buffer (1X Hank' s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7,2-7.4) 或者其他生理缓中液.
B，操作步骤
1)用无水DMSO溶解Ca1-590 AM配制成2-5mM的储存液，或将已配好的Cal-590 AM储存液取出于室温回温。(如: 若配制成4mM的母液，需向50ug Cal-590 AM中加入9.8ul 无水DMSO)
2)用HHBS或其他生理缓中液将Cal-590 AM+DMSO储存液稀释到含0.04% Pluronic F-127的10-20uM染色工作液。
[注1] :添加一定量的20% Pluronic F-127溶液到Cal-590 AM+DMSO储存液，使Puronic F-127的浓度约为0.04%，Plurnic F-127可以防上AM探针在液中聚合并促使探针更好进入细胞。但Puronic F-127可峰低AM探针的稳定性，因此只建议在配制工作液时加加入，不建议加入储存液长期保存.
[注2] :Cal-590 AM应用在大部分细胞的推荐加勤浓度为4-5uM，具体的使用浓度需根据实验要求进行优化，为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度
[注3]: Cal-590 AM工作液需现配现用，避免反复冻存.
3) [可选] 如果细胞内(比如CHO细胞)含有机明离子转运体，丙磺舒(Probenecid,1-2mM)可能需要入上述染色工作液内(在孔内的最终浓度为0.5-1mM)，以降低去酯化探针的泄露水平.
[注1]: 我司提供多种丙磺舒: 包括水溶性的丙磺舒，能降低有机溶剂的使用。
4) 加入等体积的染色工作液到细胞培养孔内，37°c孵育60-90min。然后，室温再育30min.
5) 吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理缓冲液(如有必要，使用含转运体抑制剂如1mM 丙磺舒的缓冲液)清洗细胞1~2次，以去除残留探。
6) 之后在HHBS或其他生理缓冲液(如有必要，使用含转运体抑制剂如1mM 丙磺舒的缓冲液)中，用合适的激发/发射波长来检测荧光(见产品特性:Cal-590 AM的激发和发射光谱)。
[注1]: 对于荧光显微镜检测，建议用TRITC/Cy3滤片来检测，建议用黑框/透明底的细胞培养板。
[注2]:对于荧光酶标仪检测，建议用激发波长:540nm，发射波长590nm，cut-off波长570nm来检测，建议用黑/透明底的96孔板: