ABTS diammonium salt (AzBTS-(NH4)2)
(Synonyms: 2,2'-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐,AzBTS-(NH4)2) 目录号 : GC33439
ABTS diammonium salt (AzBTS-(NH4)2)是辣根过氧化物酶（HRP）的底物，常用于酶联免疫吸附测定（ELISA）微量技术的开发。
Cas No.:30931-67-0
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
ABTS diammonium salt (AzBTS-(NH4)2) is a substrate for horseradish peroxidase (HRP), commonly used for developing micro-technique of enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)[1]. ABTS is sensitive and stable in visuality by the bluish-green color for HRP[1]. The ABTS serves as the foundation for an enhanced TEAC (Trolox Equivalent Antioxidant Capacity) method to measure the antioxidant capabilities of specific radical scavengers, including copper proteins (i.e. hemocyanin, ceruloplasmin or diamine oxidase) and some copper complexes (i.e. serine2–copper)[2]. The ABTS diammonium salt-based assay is widely employed to determine the antioxidant capacity of solid samples, including active packaging materials and conducting polymers[3].
ABTS diammonium salt-based assay coupled with high-performance liquid chromatography-diode array-mass spectrometry (HPLC-DAD-MS) equipment was employed for identification and quantification of free radical scavengers in different samples of Pu-erh tea[4]. ABTS is usually used as a substrate and is prepared in McIlvaine-puffer buffer (pH 2.2-7.5), 50mmol/L sodium acetate buffer (pH 3.0-6.0), and 100mmol/L sodium tartrate buffer (pH 2.0-5.5) to determine the optimal pH of purified rPsaDyP[5].
References:
[1] Matsuda H, Tanaka H, Blas B L, et al. Evaluation of ELISA with ABTS, 2-2'-azino-di-(3-ethylbenzthiazoline sulfonic acid), as the substrate of peroxidase and its application to the diagnosis of schistosomiasis[J]. The Japanese Journal of Experimental Medicine, 1984, 54(3): 131-138.
[2] Konan K V, Le Tien C, Mateescu M A. Electrolysis-induced fast activation of the ABTS reagent for an antioxidant capacity assay[J]. Analytical Methods, 2016, 8(28): 5638-5644.
[3] Hsu C F, Peng H, Basle C, et al. ABTS•+ scavenging activity of polypyrrole, polyaniline and poly (3, 4‐ethylenedioxythiophene)[J]. Polymer international, 2011, 60(1): 69-77.
[4] Qian Z M, Guan J, Yang F Q, et al. Identification and quantification of free radical scavengers in Pu-erh tea by HPLC-DAD-MS coupled online with 2, 2′-azinobis (3-ethylbenzthiazolinesulfonic acid) diammonium salt assay[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2008, 56(23): 11187-11191.
[5] Lauber C, Schwarz T, Nguyen Q K, et al. Identification, heterologous expression and characterization of a dye-decolorizing peroxidase of Pleurotus sapidus[J]. AMB express, 2017, 7: 1-15.
ABTS diammonium salt (AzBTS-(NH4)2)是辣根过氧化物酶（HRP）的底物，常用于酶联免疫吸附测定（ELISA）微量技术的开发[1]。ABTS因蓝绿色特性对HRP具有高灵敏度和稳定性[1]。ABTS是改进型TEAC（Trolox等效抗氧化能力）法的核心试剂，用于测定特定自由基清除剂（如铜蛋白类：血蓝蛋白、铜蓝蛋白或二胺氧化酶）及某些铜络合物（如丝氨酸2-铜复合物）的抗氧化能力[2]。基于ABTS diammonium salt的检测法被广泛用于测定固体样品（包括活性包装材料和导电聚合物）的抗氧化活性[3]。
基于ABTS diammonium salt的检测方法结合高效液相色谱-二极管阵列-质谱联用技术（HPLC-DAD-MS），被用于鉴定和定量不同普洱茶样品中的自由基清除剂[4]。ABTS通常作为底物，可配制于以下缓冲体系中以测定纯化rPsaDyP酶的最适pH：McIlvaine缓冲液（pH 2.2-7.5）、50mmol/L乙酸钠缓冲液（pH 3.0-6.0）或100mmol/L酒石酸钠缓冲液（pH 2.0-5.5）[5]。
为了在实验室规模上测试木质纤维素生物质的糖化效率，建立了一种仅使用少量生物质和低浓度酶的手动糖化方案。
1.准备酶混合物：
（1）该协议中的酶混合物由纤维素酶和β-葡萄糖苷酶（BG）组成。使用前需将这两种酶从稳定盐中去除。装有P-6DG凝胶的脱盐柱可去除纤维素酶和BG酶中的稳定盐。
（2）在进行其他步骤之前，倒掉用于抑制真菌生长的叠氮化钠溶液。
（3）将 20ml pH值为4.8的醋酸缓冲溶液倒入柱中，利用重力进行分离。
（4）将 1ml纤维素酶或BG酶与2ml pH 值为4.8的醋酸缓冲溶液置于15ml离心管中。
（5）将混合物倒入柱子中，使其流过。弃去从柱子中流出的 3ml液体。
（6）向柱子中加入4ml pH值为4.8的醋酸缓冲溶液，收集流出的4ml洗脱液于15ml离心管中。这就是脱盐后的酶。
（7）向柱子中加入100ml的MilliQ水以清洗柱子。清洗过的柱子可重新用于后续的脱盐过程。
（8）在底部封闭柱体，然后加入0.02%的叠氮化钠溶液。用盖子封住柱体顶部，再将其置于室温下保存。
（9）完成纤维素酶和BG的脱盐过程后，用pH值为4.8的醋酸缓冲溶液将脱盐后的BG材料稀释350倍。
（10）将脱盐纤维素酶与脱盐稀释的BG以5:3的比例混合。
（11）向混合物中加入醋酸缓冲溶液（pH4.8），直至溶液总体积达到原体积的十倍。该酶混合物将用于糖化测定。该酶混合物应在配制之日起两个月内使用。
2.制备葡萄糖氧化酶（GOD）-过氧化物酶（POD）溶液及校准曲线：
（1）按照配方说明制备 100ml GOD-POD 溶液。该溶液由50mg ABTS、44.81毫克葡萄糖氧化酶以及173µl 4%过氧化物酶组成。加入醋酸缓冲溶液（pH值4.5）后，溶液最终体积达到100ml。
（2）配制一系列浓度范围在20µM至200µM的葡萄糖稀释液。
3.测定酶活性：
（1）将4.5mg的滤纸放入三个带安全锁的离心管中。另外还要准备一个空白对照，即一个不放滤纸的带安全锁的离心管。
（2）无论滤纸是否存在，向每个带安全锁的离心管中加入450µl醋酸缓冲溶液（pH值4.8）和50µl酶混合物。
（3）样品应在50°C的恒温振荡器中孵育1小时，振荡频率为12.5Hz。
（4）样品和空白对照需在99℃下煮沸5分钟，期间避免任何晃动。
（5）将样品在23477g的离心力下离心5分钟。
（6）用pH值为4.8的醋酸缓冲溶液将上清液稀释20倍。
（7）采用GOD-POD测定稀释上清液中的葡萄糖释放量，并以滤纸单位（FPU）/ml表示酶混合物的活性。
Reference:
[1] Van Acker R, Vanholme R, Piens K, et al. Saccharification protocol for small-scale lignocellulosic biomass samples to test processing of cellulose into glucose[J]. Bio-Protocol, 2016, 6(1): e1701-e1701.
| Cas No. | 30931-67-0 | SDF | |
| 别名 | 2,2'-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐,AzBTS-(NH4)2 | ||
| Canonical SMILES | CCN1C(C=CC(S(=O)([O-])=O)=C2)=C2S/C1=N/N=C(SC3=C4C=CC(S(=O)([O-])=O)=C3)\N4CC.[NH4+].[NH4+] | ||
| 分子式 | C18H24N6O6S4 | 分子量 | 548.68 |
| 溶解度 | Water : ≥ 50 mg/mL (91.13 mM) | 储存条件 | Store at 2-8°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.8226 mL | 9.1128 mL | 18.2256 mL |
| 5 mM | 0.3645 mL | 1.8226 mL | 3.6451 mL |
| 10 mM | 0.1823 mL | 0.9113 mL | 1.8226 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
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