4-Methylumbelliferyl-β-D-Galactoside
(Synonyms: 4-甲基伞形酮酰-beta-D-吡喃糖苷) 目录号 : GC49114
4-Methylumbelliferyl-β-D-Galactoside是一种荧光底物,可用于酶释放法检测人类自然杀伤(NK)细胞活性。
Cas No.:6160-78-7
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
4-Methylumbelliferyl-β-D-Galactoside is a fluorescent substrate that is used for the enzyme release assay to detect human NK cell activity[1]. 4-Methylumbelliferyl-β-D-Galactoside is hydrolyzed during the enzymatic reaction, and the released 4-methylumbelliferone could be quantified by fluorometry [2]. 4-Methylumbelliferyl-β-D-Galactoside can act as the substrate for rapid detection of total and fecal coliform bacteria (TC and FC) in drinking water [3]. 4-Methylumbelliferyl-β-D-Galactoside is currently used to develop a series of highly sensitive assays to probe β-D-galactoside activity in cells[4].
References:
[1] Ohmori H, Ikeda H, Tanigawa T, et al. Enzyme release assay of human NK cell activity using β-galactosidase-expressing K562 target cell line[J]. Journal of immunological methods, 1993, 164(1): 131-135.
[2] Hattenberger M, Mascher F, Kalcher K, et al. Improved method for the fluorimetric detection of β-D-galactosidase in water[J]. International journal of hygiene and environmental health, 2001, 203(3): 281-287.
[3] Berg J D, Fiksdal L. Rapid detection of total and fecal coliforms in water by enzymatic hydrolysis of 4-methylumbelliferone-beta-D-galactoside[J]. Applied and environmental microbiology, 1988, 54(8): 2118-2122.
[4] Ramsay J P. High-throughput β-galactosidase and β-glucuronidase assays using fluorogenic substrates[J]. Bio-protocol, 2013, 3(14): e827-e827.
4-Methylumbelliferyl-β-D-Galactoside是一种荧光底物,可用于酶释放法检测人类自然杀伤(NK)细胞活性[1]。4-Methylumbelliferyl-β-D-Galactoside在酶促反应中被水解,释放出的4-甲基伞形酮可通过荧光测定法进行定量[2]。4-Methylumbelliferyl-β-D-Galactoside可作为快速检测饮用水中总大肠菌群和粪大肠菌群(TC/FC)的底物[3]。4-Methylumbelliferyl-β-D-Galactoside目前被用于开发一系列高灵敏度检测方法以探测细胞内的β-D-半乳糖苷酶活性[4]。
基于4-Methylumbelliferyl-β-D-Galactoside的β-半乳糖苷酶活性检测实验方案
本实验方案源自文献。请根据您的具体需求进行修改。
1. 溶液制备
(1)底物溶液:
称取2.5mg 的4-Methylumbelliferyl-β-D-Galactoside,溶于1ml枸橼酸-磷酸钠缓冲液(pH 4.5)中,4℃避光保存,现配现用。
(2) 4-Methylumbelliferone (4-MU)标准物质
原液A (1mM): 4-MU 1.98mg溶于10ml蒸馏水中,稀释至不同浓度:0、0.1、0.5、1、5、10μM。
(3)反应缓冲液:
枸橼酸-磷酸钠缓冲液(50mM, pH 4.5),含0.45% NaCl。
2. 样品制备
收集Jurkat细胞,用PBS洗涤2次,加入细胞裂解液,4℃裂解30min,12000rpm离心10min,取上清液进行蛋白定量。
3. 酶测定
通过混合来启动酶促反应:
(1)含0.1%白蛋白的裂解细胞悬液250μl(220μl细胞悬液加入30μl细胞裂解缓冲液后立即裂解于PBS中)。
(2) 750μl 的4-Methylumbelliferyl-β-D-Galactoside溶于50mM枸橼酸-磷酸缓冲液中,pH 4.5,NaCl浓度0.45%。反应混合物中的最终底物浓度为0.8mM。
(3)将混合物在37℃孵育30min。时间结束后,加入10ml 100mM甘氨酸-氢氧化钠缓冲液,pH10.7终止酶促反应。对空白混合物使用相同的方案。
(4)用荧光分光光度计测定相对荧光(激发波长365nm,发射波长445nm)。将结果与4-MU标准曲线进行比较。酶活性表示为μU/细胞数,其中U为每1min催化1μM底物转化的酶量。
References:
[1] Kwapiszewski R, Szczudlowska J, Kwapiszewska K, et al. Determination of acid ?-galactosidase activity: methodology and perspectives[J]. Indian Journal of Clinical Biochemistry, 2014, 29(1): 57-62.
| Cas No. | 6160-78-7 | SDF | |
| 别名 | 4-甲基伞形酮酰-beta-D-吡喃糖苷 | ||
| Canonical SMILES | CC(C1=CC=C(O[C@@H]2O[C@@H]([C@@H]([C@@H]([C@H]2O)O)O)CO)C=C1O3)=CC3=O | ||
| 分子式 | C16H18O8 | 分子量 | 338.3 |
| 溶解度 | 50 mg/ml in DMSO (Need ultrasonic), Ethanol: slightly soluble, Methanol: slightly soluble | 储存条件 | Store at -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液;一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限:-80°C 储存时,请在 6 个月内使用,-20°C 储存时,请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度,请将管子加热至37℃,然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案:配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸:配备RT,或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
![]() |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.956 mL | 14.7798 mL | 29.5596 mL |
| 5 mM | 591.2 μL | 2.956 mL | 5.9119 mL |
| 10 mM | 295.6 μL | 1.478 mL | 2.956 mL |
| 第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量) | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg | 动物平均体重 | g | 每只动物给药体积 | ul | 动物数量 | 只 | |||
| 第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶于水的药物;不同批次药物配方比例不同,请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方) | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度: mg/ml;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL,
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL saline,混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的;
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入,进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液,可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00%
- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
