Tumor Tissue Dissociation Solution

配制肿瘤组织消化液
提前将消化液及添加剂 (20×) 在 4°C 解冻并充分混匀。在无菌环境下配制肿瘤组织消化液，充分混匀后置于冰上备用。

注：a. 初次解冻后，建议将添加剂 (20×) 适当分装，避免反复冻融。

b. 配制好的肿瘤组织消化液建议尽快使用。24 h 内使用可置于 4°C 储存，短时间内不用可置于 -20°C 储存，但建议 1 个月内使用完毕。

肿瘤组织消化
1. 肿瘤组织预处理：用手术剪或手术刀将肿瘤组织剪切成 1 - 3 mm3 的碎片。

2. 肿瘤组织消化：根据肿瘤组织碎片大小加入适量的肿瘤组织消化液，一般消化液的体积为组织体积的 20 - 50 倍。混匀后置于 37°C 培养箱中孵育消化。由于不同类型的肿瘤样本在组织来源、肿瘤亚型及患者间存在差异，所需的消化时间可能会有所不同，一般消化时间为 30 - 120 min。

注：消化过程需要严密监控，过度消化会降低类器官形成的效率。消化过程中，可进行显微镜检查，观察到大量单个细胞或直径小于 70 μm 的细胞团时，可终止消化。

3. 终止消化：确认消化完成后，在组织悬液中加入胎牛血清使其终浓度为 2 - 5%，轻轻吹打混匀终止消化。

4. 细胞回收：将上述细胞悬液用筛网过滤或离心收集细胞。用类器官基础培养基清清洗细胞 2 - 3 次，200 - 300 g 离心 3 min，收集细胞用于类器官培养。