TAT-HA2 Fusion Peptide
目录号 : GC20218TAT-HA2 Fusion Peptide是由HIV TAT跨膜肽和流感病毒HA2融合肽组成的双功能肽。
Cas No.:923954-79-4
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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TAT-HA2 Fusion Peptide is a bifunctional peptide composed of HIV TAT transmembrane peptide and influenza virus HA2 fusion peptide [1]. TAT-HA2 Fusion Peptide is mainly used to promote the entry of macromolecular drugs into cells and their release from endosomes [2-3].
References:
[1]. Untener EA, Comfort KK, Maurer EI, et al. Tannic acid coated gold nanorods demonstrate a distinctive form of endosomal uptake and unique distribution within cells. ACS Applied Materials & Interfaces. 2013 Sep 11; 5(17): 8366-8373.
[2]. Tünnemann G, Martin RM, Haupt S, et al. Cargo‐dependent mode of uptake and bioavailability of TAT‐containing proteins and peptides in living cells. The FASEB journal. 2006 Sep; 20(11): 1775-1784.
[3]. Morris DP, Snipes LC, Hill SA, et al. A reversible cell penetrating peptide-cargo linkage allows dissection of cell penetrating peptide-and cargo-dependent effects on internalization and identifies new functionalities of putative endolytic peptides. Frontiers in Pharmacology. 2022 Nov 21; 13: 1070464.
TAT-HA2 Fusion Peptide是由HIV TAT跨膜肽和流感病毒HA2融合肽组成的双功能肽 [1]。TAT-HA2 Fusion Peptide主要用于促进大分子药物进入细胞并从内体释放 [2-3]。
本方案以TAT-HA2 Fusion Peptide介导的大分子递送实验为例，仅供参考。实际应用条件可能需要根据具体实验需求进行优化 [1-2]。
1. 试剂和材料准备
合成纯品TAT-HA2 Fusion Peptide、大分子cargo、HeLa细胞、RPMI 1640培养基、FBS、抗生素、无血清培养基、PBS，胰酶等常规细胞操作试剂。
2. 实验步骤
（1）细胞准备
将细胞以1×10⁵ cells/mL接种于6孔板或24孔板中，培养至60-80%融合度。递送实验前换为无血清培养基，PBS洗涤一次备用。
（2）TAT-HA2 Fusion Peptide/Cargo复合物的制备
在无血清培养基中混合TAT-HA2融合肽和大分子cargo，室温孵育15-30分钟形成复合物。TAT-HA2 Fusion Peptide：10µM，蛋白/DNA/siRNA：1-5µg。
（3）细胞递送
将复合物轻轻加入待处理细胞中，37℃孵育1-4h。
培养结束后，用PBS洗涤细胞2-3次，去除未进入细胞的多肽或未结合cargo。
换用含血清的正常培养基，继续培养或进行下游分析。
3. 检测与结果分析
（1）显微镜观察
cargo为荧光标记分子，可直接进行荧光成像，判断其亚细胞定位。
（2）流式细胞术
对处理后细胞进行胰酶消化、重悬、定量分析进入细胞的cargo比例。
（3）蛋白/核酸功能验证
Western blot、qPCR、报告基因检测等方法评估cargo表达及生物学功能。
注意事项
（1）TAT-HA2 Fusion Peptide/Cargo复合物形成需在无血清条件下进行，血清可能抑制其穿膜能力。
（2）不同细胞对TAT-HA2 Fusion Peptide的摄取效率不同，实验前建议进行小规模预实验优化浓度与孵育时间。
（3）实验操作需注意无菌、温度控制，特别是细胞状态应健康、无污染。
（4）融合肽储存液避免反复冻融，建议分装于-20℃保存。
References:
[1]. Tünnemann G, Martin RM, Haupt S, et al. Cargo?dependent mode of uptake and bioavailability of TAT?containing proteins and peptides in living cells. The FASEB journal. 2006 Sep; 20(11): 1775-1784.
[2]. Morris DP, Snipes LC, Hill SA, et al. A reversible cell penetrating peptide-cargo linkage allows dissection of cell penetrating peptide-and cargo-dependent effects on internalization and identifies new functionalities of putative endolytic peptides. Frontiers in Pharmacology. 2022 Nov 21; 13: 1070464.
| Cas No. | 923954-79-4 | SDF | |
| 分子式 | C149H243N53O39S | 分子量 | 3432.92 |
| 溶解度 | H2O : 100 mg/mL (29.13 mM; ultrasonic and warming and heat to 60°C) | 储存条件 | Store at -20°C,Sealed storage, away from moisture and light, under nitrogen |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 0.2913 mL | 1.4565 mL | 2.913 mL |
| 5 mM | 0.0583 mL | 0.2913 mL | 0.5826 mL |
| 10 mM | 0.0291 mL | 0.1456 mL | 0.2913 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
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