TAT-Cre Recombinase
目录号 : GC27163TAT-Cre Recombinase (TAT-Cre重组酶)是Glpbio自主研发的PerfectProtei技术平台表达、纯化获得的N-端含有组氨酸标签(His-tag)、细胞穿透肽TAT (Transactivator of transcription)以及细胞核定位信号肽(Nuclear localization signal, NLS)的Cre Recombinase重组蛋白。本产品常用于和培养细胞孵育，实现细胞内loxP位点间的DNA进行位点特异性重组。
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
_1-3.$$$39978408@51.jpg');)
_1-9.$$$38538795@65.jpg');)
_1-9.$$$39112701@51.jpg');)
_1-7.$$$37316672@70.jpg');)
_366-372.$$$36198801@70.jpg');)
.$$$38565142@65.jpg');)
_1867-1883.$$$33248023@67.jpg');)
_eads6055.$$$39977546@45.jpg');)
_eadm9805.$$$40080571@45.jpg');)
_eadj3020.$$$39666821@45.jpg');)
_1-20.$$$39757301@28.jpg');)
_1-24.$$$38898113@28.jpg');)
_273-287.$$$36806353@46.jpg');)
_1-16.$$$37156877@44.jpg');)
_1-19.$$$37460805@44.jpg');)
_1291-1307.$$$34518654@46.jpg');)
Cre Recombinase是来源于大肠杆菌噬菌体P1的一种I型拓朴异构酶(Type I topoisomerase)，也是一种酪氨酸重组酶(Tyrosine recombinase)，能识别34bp的loxP位点，两端为两个13bp的反向重复序列(Inverted repeats, ATAACTTCGTATA and TATACGAAGTTAT)，中间是8bp的间隔区(Spacer region, NNNTANNN)，并能催化loxP位点之间的DNA发生重组。重组产物根据loxP位点的位置和相对方向的不同而不同，两个含单loxP位点的DNA将发生融合：两个同方向的loxP位点间的DNA将以环状形式被切割，而两个反向loxP位点间的DNA序列将被翻转[1,2]。
细胞穿透肽TAT是来源于自HIV-1病毒复制和基因表达所必须的反式激活因子中的一段约10个氨基酸的带有正电荷的肽段。目前有研究表明，TAT融合蛋白可以通过Caveolar介导的胞吞作用(Caveolar endocytosis)被细胞内化，不依赖于网格蛋白介导的胞吞作用。因而可以使得与之融合后的各种分子(包括多肽、蛋白质、反义寡核苷酸链、磁性纳米颗粒和脂质体)能够穿透细胞膜，可以适用于很多方面的应用 [3]。
Cre Recombinase在体外和体内DNA的遗传改造中具有广泛的应用价值，但其局限性之一在于难以在哺乳动物细胞中表达传递具有稳定活性的酶。针对这一问题的常用操作有：瞬时转染表达Cre Recombinase的DNA载体，但存在转染效率低，导致重组效率不稳定或低的问题；病毒转导，该方法虽然更有效，但存在插入突变的风险。Glpbio研发的细胞渗透性TAT-Cre Recombinase的重组融合蛋白可以直接传递至哺乳动物细胞内，由NLS辅助融合蛋白迅速入核，催化高效重组，同时对使用剂量以及作用时间均能够进行精准地控制，避免了外源的DNA整合至基因组中，对实验结果产生影响。
使用说明：
1.在转染的前一天(18-24h)接种细胞(具体的细胞数量因细胞类型、大小和细胞生长速度而不同，可以进行预实验确定最佳接种数量)，使第二天细胞密度达到约60-80%。以loxP-STOP-loxP-mCherry HeLa Cells 为例，可以在前一天接种105个细胞至24孔板内进行培养过夜。
2.以24孔板为例，取适量解冻的TAT-Cre Recombinase用完全培养基稀释至适当浓度(推荐在1-10µM浓度范围内进行摸索和尝试，初次实验推荐尝试3、4、5、6和7µM)，并用移液器充分吹打混匀，经0.2μm孔径滤器过滤后备用。将培养有细胞的24孔板每孔用500μl PBS洗涤一次，然后把稀释好的TAT-Cre Recombinase均匀滴加到整个孔内，500μl/孔，并轻轻混匀。
注：如果希望节约使用TAT-Cre Recombinase，可以保持工作浓度不变，适当减小使用体积，使稀释好的TAT-Cre Recombinase能充分覆盖细胞即可。
3.将细胞放入细胞培养箱内孵育。初次处理时建议每30-60分钟后观察细胞状态，当细胞出现明显的死亡时(死亡率达到50-80%)，须使用PBS洗涤两次以避免TAT-Cre Recombinase产生进一步的细胞毒性。由于不同类型的细胞对于TAT-Cre Recombinase的敏感性不同，建议进行预实验以确定最佳作用时间。
注：TAT-Cre Recombinase浓度较高时会对细胞会产生一定的毒性，细胞毒性可以被看作TAT-Cre Recombinase穿透细胞膜进入细胞的指标；通常较多细胞出现死亡，但仍然有部分细胞能存活时，是比较理想的情况，此时能获得重组效果比较理想的细胞。如果没有明显的细胞毒性，通常宜适当提高TAT-Cre Recombinase的浓度。
4.加入新鲜的完全培养液进行培养，建议每天或者每隔一天更换培养液。
5.后续酌情使用多克隆细胞或筛选单克隆细胞用于后续实验。无论多克隆细胞还是单克隆细胞，都可以提取基因组DNA并进行；常规PCR的定性鉴定或qPCR的定量鉴定。
| Cas No. | SDF | ||
| 分子式 | 分子量 | ||
| 溶解度 | 储存条件 | -80℃ | |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >95.00%
- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet