Home>>Kits>>RIPA Lysis Buffer (Strong)

RIPA Lysis Buffer (Strong)

目录号 : GK10023

广泛用于报告基因检测、蛋白质激酶实验、免疫测定和蛋白质纯化的裂解液和洗涤缓冲液

规格 价格 库存 购买数量
100mL
¥210.00
现货

Customer Review

Based on customer reviews.

电话:400-920-5774 Email: sales@glpbio.cn

Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.

产品文档

View current batch:

实验参考方法

1.细胞样品:

(1)融解RIPA Lysis Buffer,混匀。取适当量的裂解液,在使用前加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。可根据实验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶抑制剂Cocktails。

(a)贴壁细胞:弃培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250 uL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触(一般情况下裂解液接触动物细胞1-2s后,细胞就会被裂解)。植物细胞宜在冰上裂解2-10 min。

(b)悬浮细胞:离心收集细胞,轻轻涡旋或者弹击管底使细胞尽量分散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。轻弹管底以便充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。

(c)细菌或酵母:取1 mL菌液或酵母液,离心去上清(或可使用PBS洗涤一次,充分去除液体),轻轻涡旋或者弹击管底把细菌或酵母尽量分散。加入100-200 uL裂解液,轻轻涡旋或者弹击管底以混匀,冰上裂解2-10min(如果希望获得更好的裂解效果,细菌和酵母可以分别使用溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化,然后再使用本裂解液进行裂解)。

(2)充分裂解后,10000-14000g离心3-5 min,取上清,即可进行后续的PAGE、WB和IP等操作。

2.组织样品:

(1)把组织剪切成细小的碎片。

(2)融解RIPA Lysis Buffer (Medium),混匀。取适当量的裂解液,在使用前加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。可根据实验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶抑制剂Cocktails。

(3)按照每20  mg组织加入150-250  uL裂解液的比例加入裂解液。(若裂解不充分可适当增加裂解液用量,如果需要高浓度蛋白样品,可适当减少裂解液的用量。)

(4)用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。或把组织样品冷冻后液氮研磨,研磨充分后加入裂解液进行裂解。

(5)充分裂解后,10000-14000g离心3-5min,取上清,即可进行后续的PAGE、WB和IP等操作。

注意事项

(1)裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞或者1 mL的菌液或酵母液中的细菌和酵母量加入150 uL裂解液已足够,若细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200 uL或250 uL。每100万动物细胞用100 uL本产品裂解后获得的上清,其蛋白浓度约为2-4 mg/mL,不同细胞有所不同。

(2)每20mg冻存的小鼠肝脏组织用200 uL本裂解液裂解后获得的上清,其蛋白浓度约为15-25mg/mL,不同状态的不同组织有所不同。

(3)如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈涡旋使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器或研磨设备,缺点是不如匀浆或研磨那样裂解比较充分。

(4)RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物,是正常现象。在不检测和基因组DNA紧密结合的蛋白情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组紧密结合的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,如NF-kappaB、p53等时,通常不必进行超声处理,即可检测到这些转录因子。

(5)为取得最佳的使用效果,建议适当分装后使用尽量避免反复冻融。

(6)裂解样品的所有步骤都需在冰上或4°C进行。

产品描述

RIPA(Radio-Immunoprecipitation Assay) Lysis Buffer (Strong)  是广泛用于报告基因检测、蛋白质激酶实验、免疫测定和蛋白质纯化的裂解液和洗涤缓冲液。RIPA Lysis Buffer (Strong) 的主要成分为 50 mMTris(pH 7.4)、150 mM NaCl、1%Triton X-100、1% sodium deoxycholate、0.1%SDS和一般的蛋白酶和磷酸酶抑制剂(如sodium orthovanadate, sodium fluoride和EDTA),可有效抑制蛋白质的降解。

该产品适用于细菌、真菌、动物和植物的细胞或组织样品,使用该产品得到的蛋白样品可用于常规的蛋白质印迹(Western blotting,WB)、免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)、免疫共沉淀(Coimmunoprecipitation,Co-IP)和酶联免疫吸附测定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA)等实验。

产品组成

Catalog No. Components 100 mL Storage
GK10023-R RIPA Lysis Buffer (Strong) 100 mL -20°C
GK10023-P PMSF (100mM) 1 mL -20°C
Stored at -20°C, and is stable for up to 12 months.