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RIPA Lysis Buffer (Strong)

目录号 : GK10023

广泛用于报告基因检测、蛋白质激酶实验、免疫测定和蛋白质纯化的裂解液和洗涤缓冲液

RIPA Lysis Buffer (Strong) Chemical Structure

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100mL
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Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.

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实验参考方法

1.细胞样品:

(1)融解RIPA Lysis Buffer,混匀。取适当量的裂解液,在使用前加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。可根据实验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶抑制剂Cocktails。

(a)贴壁细胞:弃培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250 uL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触(一般情况下裂解液接触动物细胞1-2s后,细胞就会被裂解)。植物细胞宜在冰上裂解2-10 min。

(b)悬浮细胞:离心收集细胞,轻轻涡旋或者弹击管底使细胞尽量分散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。轻弹管底以便充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。

(c)细菌或酵母:取1 mL菌液或酵母液,离心去上清(或可使用PBS洗涤一次,充分去除液体),轻轻涡旋或者弹击管底把细菌或酵母尽量分散。加入100-200 uL裂解液,轻轻涡旋或者弹击管底以混匀,冰上裂解2-10min(如果希望获得更好的裂解效果,细菌和酵母可以分别使用溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化,然后再使用本裂解液进行裂解)。

(2)充分裂解后,10000-14000g离心3-5 min,取上清,即可进行后续的PAGE、WB和IP等操作。

2.组织样品:

(1)把组织剪切成细小的碎片。

(2)融解RIPA Lysis Buffer (Strong),混匀。取适当量的裂解液,在使用前加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。可根据实验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶抑制剂Cocktails。

(3)按照每20  mg组织加入150-250  uL裂解液的比例加入裂解液。(若裂解不充分可适当增加裂解液用量,如果需要高浓度蛋白样品,可适当减少裂解液的用量。)

(4)用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。或把组织样品冷冻后液氮研磨,研磨充分后加入裂解液进行裂解。

(5)充分裂解后,10000-14000g离心3-5min,取上清,即可进行后续的PAGE、WB和IP等操作。

注意事项

(1)裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞或者1 mL的菌液或酵母液中的细菌和酵母量加入150 uL裂解液已足够,若细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200 uL或250 uL。每100万动物细胞用100 uL本产品裂解后获得的上清,其蛋白浓度约为2-4 mg/mL,不同细胞有所不同。

(2)每20mg冻存的小鼠肝脏组织用200 uL本裂解液裂解后获得的上清,其蛋白浓度约为15-25mg/mL,不同状态的不同组织有所不同。

(3)如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈涡旋使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器或研磨设备,缺点是不如匀浆或研磨那样裂解比较充分。

(4)RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物,是正常现象。在不检测和基因组DNA紧密结合的蛋白情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组紧密结合的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,如NF-kappaB、p53等时,通常不必进行超声处理,即可检测到这些转录因子。

(5)为取得最佳的使用效果,建议适当分装后使用尽量避免反复冻融。

(6)裂解样品的所有步骤都需在冰上或4°C进行。

产品描述

RIPA (Radio-Immunoprecipitation Assay) Lysis Buffer (Strong) is a lysis and washing buffer widely used in reporter gene detection, protein kinase experiments, immunoassays, and protein purification. The main components of RIPA Lysis Buffer (Strong) are 50 mMTris (pH 7.4), 150 mM NaCl, 1% Triton X-100, 1% sodium deoxycholate, 0.1% SDS and general protease and phosphatase inhibitors (such as sodium orthovanadate, Sodium fluoride and EDTA), can effectively inhibit protein degradation.

This product is suitable for cell or tissue samples of bacteria, fungi, animals and plants. The protein samples obtained by using this product can be used for conventional Western blotting (WB), immunoprecipitation (IP), coimmunoprecipitation , Co-IP) and Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay (ELISA) and other experiments.

RIPA(放射免疫沉淀测定)裂解缓冲液(强)是一种广泛用于报告基因检测、蛋白激酶实验、免疫分析和蛋白纯化的裂解和洗涤缓冲液。RIPA裂解缓冲液(强)的主要成分包括50mM Tris(pH7.4)、150mM NaCl、1% Triton X-100、1%十二胆酸钠盐、0.1% SDS以及常规的蛋白酶和磷酸酶抑制剂(如正硼酸钠,氟化钠和EDTA),可以有效地抑制蛋白质降解。

这个产品适用于细菌、真菌、动物和植物的细胞或组织样本。使用该产品获得的蛋白质样品可用于常规的Western blotting(WB)、免疫沉淀(IP)、共同免疫沉淀(Co-IP)和酶联免疫吸附测定(ELISA)等实验。

产品组成

Catalog No. Components 100 mL Storage
GK10023-R RIPA Lysis Buffer (Strong) 100 mL -20°C
GK10023-P PMSF (100mM) 1 mL -20°C
Stored at -20°C, and is stable for up to 12 months.