Nitrocefin
(Synonyms: 头孢硝噻吩) 目录号 : GC14823
Nitrocefin是一种具有显色特性的头孢菌素衍生物。
Cas No.:41906-86-9
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Nitrocefin is a cephalosporin derivative with color-indicating properties [1]. When β-lactamase hydrolyzes the β-lactam ring of Nitrocefin, the compound changes color from yellow to red, enabling visual detection [2]. Nitrocefin is primarily used for rapid screening of bacteria for β-lactamase activity [3].
References:
[1]. Lee M, Hesek D, Mobashery S. A practical synthesis of nitrocefin[J]. The Journal of organic chemistry, 2005, 70(1): 367-369.
[2]. Worthington R J, Melander C. Overcoming resistance to β-lactam antibiotics[J]. The Journal of organic chemistry, 2013, 78(9): 4207-4213.
[3]. Chow C, Xu H, Blanchard J S. Kinetic characterization of hydrolysis of nitrocefin, cefoxitin, and meropenem by β-lactamase from Mycobacterium tuberculosis[J]. Biochemistry, 2013, 52(23): 4097-4104.
Nitrocefin是一种具有显色特性的头孢菌素衍生物 [1]。当β-内酰胺酶水解Nitrocefin的β-内酰胺环时，该化合物的颜色会从黄色变为红色，从而实现目视检测 [2]。Nitrocefin主要用于快速筛查细菌的β-内酰胺酶活性 [3]。
本方案仅提供实验指导。实际应用需根据您的研究目标、样本类型和检测平台进行优化和调整 [1-2]。
1. 试剂和材料准备
Nitrocefin、DMSO、PBS、菌落、菌悬液或裂解细胞样本、水解缓冲液。
2. 头孢硝芬溶液的制备
（1）储备液（1-10mg/mL）：将5-10mg Nitrocefin溶于DMSO中，充分混匀，避光保存，并在-20℃下保存数月。
（2）工作液（0.5-1.0mg/mL）：将储备液用PBS或检测缓冲液稀释至0.5-1.0mg/mL。如果制备后溶液呈红色（而非黄色），则表示浓度过高，应进一步稀释至黄色溶液。工作液应避光保存，-20℃保存，并在14天或2个月内使用。
3. β-内酰胺酶活性快速检测方法
（1）玻片法：在干净的玻片上滴加1滴工作液，接种单个菌落，观察其是否呈红色（20-30分钟内）。
（2）直接接触法：将工作液滴于菌落上，20-30分钟内观察其颜色是否变为红色。
（3）菌液法：在1mL菌液中加入3-5滴工作液，20-30分钟内颜色变为红色，为阳性结果。
（4）细胞裂解法：取1mL菌液，超声裂解后，加入3-5滴工作液，40分钟内颜色变为红色，为β-内酰胺酶活性。
4. 光度定量检测
（1）标准溶液及反应体系：以Nitrocefin和水解缓冲液+DMSO配制标准溶液及标准梯度。
（2）样品处理：将固体菌株离心、重悬、超声裂解后，取上清液进行测定。反应混合物：将样品+反应混合物（例如，测定缓冲液+Nitrocefin）加入到每个孔中。
（3）读数与计算：在490nm处进行动力学读数。建议每分钟读数一次，持续30-60分钟。根据标准曲线和时间变化计算β-内酰胺酶活力。
（4）单位定义为每分钟水解1µmol Nitrocefin所需的酶量。
操作注意事项
（1）操作过程中避免光照，以防止药物降解。
（2）为保持黄色配方的准确性，请勿在工作液变红前使用。
（3）应针对每种样品类型通过梯度浓度和时间优化实验条件。
References:
[1]. Shannon K, Phillips I. ?-Lactamase detection by three simple methods: Intralactam, nitrocefin and acidimetric[J]. Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 1980, 6(5): 617-621.
[2]. Allen C, Turner C, Kalsi S, et al. Development of a rapid phenotypic test on a microfluidic device for carbapenemase detection using the chromogenic compound nitrocefin[J]. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease, 2020, 96(4): 114926.
| Cas No. | 41906-86-9 | SDF | |
| 别名 | 头孢硝噻吩 | ||
| 化学名 | (6R,7R)-3-((E)-2,4-dinitrostyryl)-8-oxo-7-(2-(thiophen-2-yl)acetamido)-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylic acid | ||
| Canonical SMILES | [H][C@]1([C@@H]2NC(CC3=CC=CS3)=O)SCC(/C=C/C4=CC=C([N+]([O-])=O)C=C4[N+]([O-])=O)=C(C(O)=O)N1C2=O | ||
| 分子式 | C21H16N4O8S2 | 分子量 | 516.50 |
| 溶解度 | 20mg/ml in DMSO, 20mg/mL in DMF | 储存条件 | Store at -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 1.9361 mL | 9.6805 mL | 19.3611 mL |
| 5 mM | 0.3872 mL | 1.9361 mL | 3.8722 mL |
| 10 mM | 0.1936 mL | 0.9681 mL | 1.9361 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
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