L-Homopropargyl Glycine
(Synonyms: (S)-2-氨基-5-己炔酸,Click Tag? L-Homopropargyl Glycine,HPG) 目录号 : GC14450L-Homopropargyl Glycine是一种用于研究蛋白质合成的合成型生物正交非天然氨基酸探针。L-Homopropargyl Glycine广泛应用于生物化学研究中，用于监测细胞内蛋白质的合成情况。
Cas No.:98891-36-2
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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L-Homopropargyl Glycine is a synthetic bioorthogonal non-canonical amino acid probe used for the study of protein synthesis. L-Homopropargyl Glycine is widely used in biochemical research to monitor protein synthesis within cells[1]. When cells take up L-Homopropargyl Glycine, L-Homopropargyl Glycine is incorporated into the proteins being synthesized, replacing methionine. Through the Cu(I)-catalyzed azide-alkyne cycloaddition (CuAAC) reaction, biotin or other fluorescently labeled azides can be conjugated to proteins labeled with L-Homopropargyl Glycine, thereby enabling the capture, enrichment, and detection of newly synthesized proteins [2].
References:
[1] Tivendale ND, Fenske R, Duncan O, et al. In vivo homopropargylglycine incorporation enables sampling, isolation and characterization of nascent proteins from Arabidopsis thaliana. Plant J. 2021 Aug;107(4):1260-1276.
[2] Shen Y, Liu W, Zuo J, et al. Protocol for visualizing newly synthesized proteins in primary mouse hepatocytes. STAR Protoc. 2021 Jun 17;2(3):100616.
L-Homopropargyl Glycine是一种用于研究蛋白质合成的合成型生物正交非天然氨基酸探针。L-Homopropargyl Glycine广泛应用于生物化学研究中，用于监测细胞内蛋白质的合成情况[1]。当细胞摄取L-Homopropargyl Glycine后，L-Homopropargyl Glycine会被整合到正在合成的蛋白质中，取代甲硫氨酸的位置。通过Cu(I)催化的叠氮-炔烃环加成反应（CuAAC），可以将带有生物素或其他荧光标记的叠氮化物与HPG标记的蛋白质进行共轭反应，从而实现对新合成蛋白质的捕获、富集和检测[2]。
标记蛋白质
本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1. 溶液配制
（1）L-Homopropargyl Glycine工作液：将L-Homopropargyl Glycine溶解在无血清培养基中，终浓度为4mM。使用前需确保培养基中不含甲硫氨酸，以避免干扰实验结果。
注意：L-Homopropargyl Glycine工作液必须现配现用，避免长时间暴露在空气中。
（2）反应母液：加入0.6mL罗丹明-叠氮化物（1.25mM储备液）、0.6mL Tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride（50mM储备液，新鲜制备于水中）、1.8mL Tris(benzyltriazolylmethyl)amine（1.7mM，4:1叔丁醇:DMSO）和0.6mL CuSO4（50mM储备液）。
2.标记蛋白质
（1）细胞处理：将培养好的细胞用3×PBS洗涤，去除完全培养基；将细胞重悬于含L-Homopropargyl Glycine的无甲硫氨酸细胞培养基中，37℃孵育2小时，用PBS洗涤细胞2次，去除过量的Homopropargyl Glycine，然后将细胞团块快速冷冻并储存在-80℃。
（2）蛋白质提取：将细胞团块在冰上解冻，加入10mL细胞裂解缓冲液，向样品中加入1mL苯甲酸（250U/mL），在冰上孵育30分钟。15℃，10000g离心10分钟，并测定蛋白浓度。
3. 凝胶内荧光分析
（1）蛋白质稀释：取30mg裂解蛋白，按1mg/mL标准化至Eppendorf管。
（2）蛋白质变性：向每个样品中加入3.6μL反应母液，室温暗处孵育1小时，用5体积冰冷甲醇沉淀样品，-20℃过夜保存以去除过量点击试剂。次日，最大速度离心，去除甲醇，倒置风干2小时。用30μL 4%SDS在PBS中溶解蛋白团块，超声处理10分钟。随后95℃，变性5分钟。
（3）电泳观察：将25μL样品加载到SDS-PAGE凝胶中，150V运行1小时，然后在激发波长544nm，发射波长576nm成像。
注意事项：
（1）该方案为使用HPG用于蛋白质合成检测实验提供指导。可以根据其他文献和具体实验要求进行调整。
（2）操作应在无菌环境中进行，防止污染物干扰反应。避免直接接触反应试剂。
References:
[1] Volk RF, Montaño JL, Warrington SE, et al. Proteomic characterization of phagocytic primary human monocyte-derived macrophages. RSC Chem Biol. 2022 May 12;3(6):783-793.
[2] Jecmen T, Tuzhilkin R, Sulc M. Photo-Methionine, Azidohomoalanine and Homopropargylglycine Are Incorporated into Newly Synthesized Proteins at Different Rates and Differentially Affect the Growth and Protein Expression Levels of Auxotrophic and Prototrophic E. coli in Minimal Medium. Int J Mol Sci. 2023 Jul 22;24(14):11779.
| Cas No. | 98891-36-2 | SDF | |
| 别名 | (S)-2-氨基-5-己炔酸,Click Tag? L-Homopropargyl Glycine,HPG | ||
| 化学名 | (2S)-2-amino-5-hexynoic acid | ||
| Canonical SMILES | C#CCC[C@H](N)C(O)=O | ||
| 分子式 | C6H9NO2 | 分子量 | 127.1 |
| 溶解度 | ≤10mg/ml in PBS(pH7.2) | 储存条件 | Store at -20°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 7.8678 mL | 39.3391 mL | 78.6782 mL |
| 5 mM | 1.5736 mL | 7.8678 mL | 15.7356 mL |
| 10 mM | 0.7868 mL | 3.9339 mL | 7.8678 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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