ER–Tracker Red
(Synonyms: 红色内质网荧光探针) 目录号 : GB30168ER-Tracker dyes是一系列细胞膜渗透性的活细胞染料,高度选择性结合内质网(ER)。
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
Quality Control & SDS
- View current batch:
- Purity: >98.00%
- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
- Datasheet
本方案仅提供一个指导,请根据您的具体需要进行修改。
1.制备染色液
(1)配置DMSO储存液:使用DMSO溶解ER–Tracker Red,配置浓度为1mM的储存液。
注意:未使用的储存液分装后在-20℃或-80°C避光保存,避免反复冻融。
(2)配置工作液:用合适的缓冲液(如:无血清培养基或PBS)稀释储存液,配制浓度为100 nM-1 μM的工作液。
注意:请根据实际情况调整工作液浓度,现用现配。
2.细胞悬浮染色
(1)悬浮细胞:经4°C、1000g离心3-5分钟,弃去上清液,用PBS清洗两次,每次5分钟。
(2)贴壁细胞:使用PBS清洗两次,加入胰酶消化细胞,消化完成后经1000g离心3-5min。
(3)加入1mL的ER–Tracker Red工作溶液重悬约106个细胞,室温避光孵育5-30分钟。不同细胞最佳孵育时间不同,请根据具体实验需求自行摸索。
(4)孵育结束后,经1000g离心5分钟,去除上清液,加入PBS清洗2-3次,每次5分钟。
(5)用预温的无血清细胞培养基或PBS重悬细胞。通过荧光显微镜或流式细胞术观察。
3.细胞贴壁染色
(1)在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。
(2)从培养基中移走盖玻片,吸出过量的培养基,将盖玻片放在潮湿的环境中。
(3)从盖玻片的一角加入100μL的染料工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
(4)室温避光孵育5-30分钟。不同细胞最佳孵育时间不同,请根据具体实验需求自行摸索。
(5)孵育结束后吸弃染料工作液,使用预温的培养液清洗盖玻片2~3次。
4.显微镜检测:ER–Tracker Red的最大激发光/发射光波长分别为587 /615 nm。
注意事项:
① 如果要固定染色的细胞,建议使用4%甲醛在37℃下固定2分钟;
② 如果染色细胞需要通透,建议使用ER–Tracker Blue–White DPX(GB30171);
③ 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭;
④ 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
ER-Tracker dyes是一系列细胞膜渗透性的活细胞染料, 高度选择性结合内质网(ER). 不同于传统的内质网染料DiOC6(3), 该系列染料极少染色线粒体, 且低浓 度下染色无细胞毒性. 使用提供的优化步骤对细胞染色和甲醛处理后, 可以保留部分的活细胞染色特征.
ER-Tracker Red是一种药物的荧光偶联物, 即BODIPY™ TR标记的格列苯脲(BODIPY™ TR Glibenclamide). 格列本脲, 又名优降糖 (Glyburide), 是一种磺酰脲类口服降糖药, 用来调查胰岛素β细胞活性和胰岛素分泌, 以及研究心肌细胞功能和心律失常. 格列本脲能够结合内质网上 突出的ATP敏感性钾通道(KATP)的磺脲类受体. 格列本脲的药理学活性可能影响内质网功能. 某些特定细胞上磺脲类受体的可变表达可能引起非内质网标 记. BODIPY™ TR是Invitrogen (Molecular Probe)公司开发的BODIPY™荧光染料之一, 最大激发/发射波长~587/615nm, 光谱特性类似于传统的Texas Red, 与检测该染料的标准滤片兼容.
本品为DMSO储存液, 浓度为1mM. 用于活细胞内质网染色, 建议工作浓度约为1µM, 需根据实际情况做优化调整. 按照说明书的标准步骤操作, 活细胞染色后用甲醛等固定可保留部分染色效果.
Cas No. | SDF | ||
别名 | 红色内质网荧光探针 | ||
分子式 | C44H42BClF2N6O7S2 | 分子量 | 915.2316 |
溶解度 | A solution of DMSO | 储存条件 | Store at -20°C, protect from light, Effective for half a year. |
General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液;一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限:-80°C 储存时,请在 6 个月内使用,-20°C 储存时,请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度,请将管子加热至37℃,然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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Shipping Condition | 评估样品解决方案:配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸:配备RT,或根据请求配备蓝冰。 |
制备储备液 | |||
1 mg | 5 mg | 10 mg | |
1 mM | 1.0926 mL | 5.4631 mL | 10.9262 mL |
5 mM | 0.2185 mL | 1.0926 mL | 2.1852 mL |
10 mM | 0.1093 mL | 0.5463 mL | 1.0926 mL |
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量) | ||||||||||
给药剂量 | mg/kg | 动物平均体重 | g | 每只动物给药体积 | ul | 动物数量 | 只 | |||
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶于水的药物;不同批次药物配方比例不同,请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方) | ||||||||||
% DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
计算重置 |
计算结果:
工作液浓度: mg/ml;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL,
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL saline,混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的;
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入,进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液,可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。