Celltracker CM-Dil
(Synonyms: 活细胞示踪剂 CM-Dil) 目录号 : GC26140
Cas No.:180854-97-1
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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CelITracker CM-DiI，CAS NO.180854-97-1,DiI (DiIC18(3)) 衍生物，在Dil结构上加入了具中度巯基反应性的CM氯甲基替代基团，使其能与细胞内含巯基的肽和蛋白结合，使其能抵抗醛类的固定作用。不同于传统的细胞膜探针PKH26和Dil，CM-Dil 在细胞固定、破膜及石蜡包埋的整个过程中均能很好的保留在细胞内，因此，特别适合同时做细胞膜标记以及后续的免疫组化、荧光原位杂交或电镜观察的分析实验。
CelITracker CM-DiI适用于细胞运动或定位的监测，染料能很好维持，允许对细胞运动的多代示踪研究。具备以下特征:
a) 使用方便，只需吸掉培养液，加入探针，30min孵育，显微成像即可;
b)荧光信号至少可持续72h以上 (一般3-6代)，染料只传到子代细胞，不会染上邻近细胞;
c)毒性很低，不会影响细胞增殖和活力;
d)红色激发/发射的光谱特性(Ex/Em=553/570 nm)，适合同绿色荧光染料或蛋白联合使用进行多重标记;
总而言之，CelITracker CM-DiI具有良好的示踪特征: 对细胞无毒，稳定长效，染料很好保留在胞内，生理pH下荧光信号非常强。
保存与运输方法:
保存：-20℃干燥避光保存，有效期一年。
运输：室温运输。
本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1、 制备Celltracker CM-Dil染色液：
（1）配置染料储存液：将Celltracker CM-Dil溶于DMSO中，配置浓度为1-5mg/mL的储存液。储存液分装后在-20 °C避光保存。
（2）使用合适的缓冲液(如:无血清培养基，HBSS或PBS)稀释储存液，配制浓度为1-5μg/mL的Celltracker CM-Dil工作液，使用0.22μm滤膜过滤除菌。
注意：请根据实际情况调整Celltracker CM-Dil工作液浓度，现用现配。
2、细胞悬浮染色(以6 孔板为例)
（1）悬浮细胞经1000g离心3-5min。弃去上清液，使用PBS清洗两次，每次5分钟。
（2）贴壁细胞使用PBS清洗两次，加入胰酶消化细胞，消化完成后经1000g离心3-5min。
（3）加入1mL染料工作液重悬细胞，室温避光孵育15-30分钟，不同细胞最佳培养时间不同。
（4）孵育结束后，经1000g离心5分钟，去除上清液，加入PBS清洗2-3次，每次5分钟。
（5）使用无血清细胞培养基或PBS重悬细胞，通过荧光显微镜或流式细胞技术进行观察。
3、细胞贴壁染色
（1）在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。
（2）从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，加入PBS清洗1-2次，并将盖玻片放在潮湿的环境中。
（3）从盖玻片的一角加入100μL染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞，室温避光孵育15-30分钟。
（4）吸弃染料工作液，使用PBS清洗盖玻片2~3次，每次5分钟。
4、Celltracker CM-Dil标记微泡（Microparticles or Microvesicles）
（1）取适当体积的Celltracker CM-Dil染料储备液添加到收集到的微泡培养液中，达到5 μM的最终浓度（或使用0.5-1ml Celltracker CM-Dil工作液重悬），使用移液枪轻轻混匀；
（2）室温避光孵育30分钟，每5分钟轻轻翻转一次。
（3）将孵育完成的样品转移至离心管中，使用超速离心机以16000-18000g、4℃的条件离心30分钟；
（4）离心完成后在超净台中小心倾斜并弃去上清液，使用带无菌吸头的微量移液器，移去在试管内形成但未滴落的液体，即为标记好的外泌体；
注意：在该步骤中，游离染料随倾析的上清液一起消失，因此可以倾析溶液，但始终注意不要丢失沉淀。
5、显微镜检测：Celltracker CM-Dil的最大激发光/发射光为553/570 nm。
注意事项：
1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3）本产品可应用于固定细胞/组织以及组织切片染色，可耐受2% (w/v)多聚甲醛的固定和0.2%(w/v)Triton X-100的透化。甲醛固定、石蜡包埋、切片、二甲苯、分级乙醇和水清洗对染色无不良影响。
| Cas No. | 180854-97-1 | SDF | |
| 别名 | 活细胞示踪剂 CM-Dil | ||
| 分子式 | C68H105CI2N3O | 分子量 | 1051.5 g/mol |
| 溶解度 | Soluble in DMSO, Ethanol, DMF | 储存条件 | Desiccate at -20°C; protect from light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 0.951 mL | 4.7551 mL | 9.5102 mL |
| 5 mM | 0.1902 mL | 0.951 mL | 1.902 mL |
| 10 mM | 0.0951 mL | 0.4755 mL | 0.951 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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- COA (Certificate Of Analysis)
- SDS (Safety Data Sheet)
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