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BCA Protein Assay Kit (BCA蛋白浓度测定试剂盒)

目录号 : GK10009

BCA蛋白质测定试剂盒是一种现成的、与洗涤剂兼容的西方印迹相关的总蛋白分析试剂,用于快速确定总蛋白浓度。

BCA Protein Assay Kit (BCA蛋白浓度测定试剂盒) Chemical Structure

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500T
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Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.

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产品文档

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实验参考方法

A.试管配制

1.以50:1的比例混合BCA试剂A和BCA试剂B. 即将50 ml BCA试剂A与1 ml BCA试剂B混合.
注意: 使用以下公式确定所需工作试剂的总量.  (标准品+待测样品) x (重复次数) x (每个样品所需要的BCA工作液) =所需BCA工作液总体积.
2.按照表1配制新的标准品体系. (用0.9% NaCl或PBS稀释白蛋白 (BSA) 标准液)

表1:白蛋白(BSA)标准品的制备

  Tube Number     稀释液体积 (μl)   BSA体积 (μl)   BSA终浓度 (μg/ml)  
A 0 μl   900 μl of 2 mg/ml Stock   2000 μg/ml
B 100 μl 300 μl of tube A 1500 μg/ml
C 300 μl 300 μl of tube A 1000 μg/ml
D 200 μl 200 μl of tube B 750 μg/ml
E 300 μl 300 μl of tube C 500 μg/ml
F 300 μl 300 μl of tube E 250 μg/ml
G 300 μl 300 μl of tube F 125 μg/ml
H 400 μl 100 μl of tube G 25 μg/ml
I 300 μl 0 0 (blank)

3.将0.1 ml的每种标准品和蛋白质样品加入单独的标记试管中.
4.在每个试管中加入2 ml BCA工作试剂并充分混合.
5.在37°C下孵育30分钟.
注意:增加孵育时间和温度会增加每次测试的净562 nm吸光度, 并同时降低试剂盒的最低检测水平和测试范围.
6.将所有管子冷却到室温(RT) .
7.将分光光度计的波长设置为OD 562nm. 用水将仪器校准为零. 随后, 在10分钟内测量所有样品的吸光度.
注意: 即使冷却至室温后, 色彩仍会继续显影. 但是, 如果所有吸光度测量均在10分钟内进行, 则随后在RT处的显影太弱而不会产生明显的误差.
8.从所有读数中减去空白的OD562.
9.绘制BSA标准曲线: OD562 (Y轴) vs BSA标准浓度 (X轴)。 使用标准曲线确定每个待测样品的蛋白质浓度.

B. 微孔检测法

1.以50:1的比例混合BCA试剂A和BCA试剂B. 即将50 ml BCA试剂A与1 ml BCA试剂B混合.
注意: 使用以下公式确定所需工作试剂的总量. (标准品+待测样品) x (重复次数) x (每个样品所需要的BCA工作液) =所需BCA工作液总体积.
2.按照表2配制新的标准品体系. (用0.9% NaCl或PBS稀释白蛋白 (BSA) 标准液)

表2:白蛋白(BSA)标准品的制备

 Tube Number    稀释液体积(μl)   BSA体积 (μl)   BSA终浓度 (μg/ml)  
A 0 μl   200 μl of 2 mg/ml Stock   2000 μg/ml
B 30 μl 90 μl of tube A 1500 μg/ml
C 60 μl 60 μl of tube A 1000 μg/ml
D 60 μl 60 μl of tube B 750 μg/ml
E 60 μl 60 μl of tube C 500 μg/ml
F 60 μl 60 μl of tube E 250 μg/ml
G 60 μl 60 μl of tube F 125 μg/ml
H 100 μl 25 μl of tube G 25 μg/ml
I 60 μl 0 0 (blank)

3.将25μl的每种标准品和蛋白质样品添加到单独的微孔板孔中。
4.向每个孔中添加200μlBCA工作试剂并混合。
5.密封板并在37°C下孵育30分钟。
6.将板冷却至室温(RT).
7.在10分钟内在读板器上测量562 nm的吸光度.
8.从所有读数中减去空白的OD562.  绘制BSA标准曲线: OD562 (在Y轴上) 对BSA标准浓度 (在X轴上). 使用标准曲线确定每个待测样品的蛋白质浓度.

重要产品信息

1.如果将本试剂盒冷藏或存放在冷库中, 则试剂A或试剂B中可能会形成沉淀物. 要溶解沉淀物, 请在37°C下缓慢加热溶液, 同时进行混合或微波处理几秒钟. 如果试剂盒被细菌污染, 则将其丢弃.
2.如果样品中仍然存在还原性物质或金属螯合物而引起干扰, 建议使用Bradford分析试剂盒.
3.建议一式两份地测定不同浓度和样品的标准液. 每种测定均应绘制标准曲线.
4.彻底混合试剂A和试剂B后, 新形成的绿色浊度将消失. 它不会影响性能.
5.使用分光光度计检测蛋白质浓度时, 测定的样品量将减少. 使用37°C的培养箱时, 请防止水蒸发的影响.
6.消除或最小化干扰物质影响的几种方法:
•通过透析或凝胶过滤去除干扰物质.
•稀释样品,直到物质不再干扰为止.
•由于高浓度的去污剂也会影响结果, 因此请用三氯乙酸 (TCA) 沉淀样品中的蛋白质.
7,避免使用包括还原性物质, 螯合剂, 强酸和强碱在内的物质, 因为即使浓度很低也会干扰蛋白质的估算.

产品描述

BCA Protein Assay Kit is a ready-to-use detergent- compatible Western blot related total protein analysis reagent used for the quick determination of total protein concentration by measuring absorbance at 562 nm and comparing to a protein standard absorption vs. concentration curve, according to Smith. The protein quantification process can be finished in 45 minutes.
The BCA Protein Assay is a detergent-compatible formulation based on bicinchoninic acid (BCA) for the colorimetric detection and quantization of total protein. This method combines the well- known reduction of Cu2+ to Cu1+ by protein in an alkaline medium (the biuret reaction) with the highly sensitive and selective colorimetric detection of the cuprous cation (Cu1+) using a unique reagent containing bicinchoninic acid. The purple-colored reaction product of this assay is formed by the chelation of two molecules of BCA with one cuprous ion. This water-soluble complex exhibits a strong absorbance at 562 nm that is nearly linear with increasing protein concentrations over a broad working range (20-2,000 μg/ml).
The BCA method is not a true end-point method; that is, the final color continues to develop. However, following incubation, the rate of continued color development is sufficiently slow to allow large numbers of samples to be assayed together. The macromolecular structure of protein, the number of peptide bonds and the presence of four particular amino acids (cysteine, cystine, tryptophan and tyrosine) are reported to be responsible for color formation with BCA. Studies with di-, tri- and tetrapeptides suggest that the extent of color formation caused by more than the mere sum of individual color producing functional groups.
Accordingly, protein concentrations generally are determined and reported with reference to standards of a common protein such as bovine serum albumin (BSA). A series of dilutions of known concentration are prepared from the protein and assayed alongside the unknown before the concentration of each unknown is determined based on the standard curve. If precise quantization of an unknown protein is required, it is advisable to select a protein standard that is similar in quality to the unknown; for example, a bovine gamma globulin (BGG) standard may be used when assaying immunoglobulin samples. Two assay procedures are presented. Of these, the Test Tube Procedure requires a larger volume (0.1 ml) of protein sample; however, because it uses a sample to working reagent ratio of 1:20 (v/v), the effect of interfering substances is minimized.

BCA蛋白质测定试剂盒是一种现成的洗涤剂兼容的西方印迹相关总蛋白分析试剂,用于通过在562nm处测量吸收度并将其与蛋白质标准吸收度与浓度曲线进行比较来快速确定总蛋白质浓度。该方法可以在45分钟内完成蛋白质定量过程。
BCA蛋白质检测试剂是一种基于双(2-羟基喜树碱)酮肟酸(BCA)的洗涤剂兼容配方,用于全面检测和定量色谱法。这种方法结合了已知的碱性介质中由蛋白还原Cu2+为Cu1+(生物素反应)和使用含有双(2-羟基喜树碱)酮肟酸独特试剂高灵敏、选择性地检测亚铜阳离子(Cu1+) 的颜色反应。此次检验产生紫色反应产物是由两个分子的BCA与一个亚铜离子形成络合物而形成。这种水溶性复合物在562 nm处表现出强烈吸收,并且随着广泛工作范围内(20-2,000 μg/ml)蛋白质浓度的增加而几乎呈线性。
BCA方法不是真正的终点法,即最终颜色会持续发展。然而,在孵育后,持续颜色发展的速率足够缓慢,可以同时检测大量样品。据报道,蛋白质的高分子结构、肽键数量和四种特定氨基酸(半胱氨酸、半胱氨酸二硫化物、色氨酸和酪氨酸)对BCA产生颜色有影响。对双肽、三肽和四肽进行的研究表明,由于超过单个产生功能组所引起的颜色形成程度。
因此,通常根据共同蛋白质如牛血清白蛋白(BSA)等标准来确定并报告蛋白质浓度。从该蛋白数量已知且稀释系列中制备出一系列已知浓度,并在未知之前与未知一起进行检验以确定每个未知物体的浓度基于标准曲线。如果需要精确定量未知蛋白数,则建议选择与未知相似品质的蛋白质标准;例如,在检测免疫球蛋白样品时,可以使用牛γ球蛋白(BGG)标准。提供两种检验程序。其中,试管程序需要更大的体积(0.1 ml)的蛋白质样品;然而,由于它使用1:20(v/v)的样品到工作试剂比率,因此干扰物质的影响被最小化了。

产品组成

Components 500 tests 2500 tests 5000 tests
BCA Reagent A 100 mL 500 mL 500 mL × 2
BCA Reagent B 3 mL 5 mL × 3 5 mL × 6
Albumin (BSA) Standards
2mg/mL
1 mL × 4 1 mL × 10 2 mL × 10

功能属性

应用&特点蛋白质印迹
蛋白质表达测定
蛋白质分析和表征
蛋白质定量测定
运输方式蓝冰运输.
储存条件试剂A和B, 室温保存一年有效. 蛋白标准室温保存, 一个月有效; 4°C保存, 一年有效; -20°C可以长期保存.
用途仅供研究使用!不能用于人体。