Acridine Orange
(Synonyms: 吖啶橙,NSC 194350) 目录号 : GC41242Acridine Orange是一种可穿透细胞的核酸选择性荧光染料， Acridine Orange可与DNA或RNA结合时产生荧光，与双链DNA结合时产生绿色荧光（激发光为488nm；发射光为530nm绿色荧光）。
Cas No.:494-38-2
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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Acridine Orange is a cell-permeable, nucleic-acid-selective fluorescent dye. When bound to nucleic acids, Acridine Orange emits fluorescence: upon intercalation into double-stranded DNA produces green fluorescence (excitation 488nm, emission 530nm). Because Acridine Orange associates with DNA and RNA to different extents, Acridine Orange binding to single-stranded DNA or RNA yields orange to red fluorescence (excitation 488nm, emission 640nm). Consequently, Acridine Orange is commonly employed to distinguish normal, apoptotic, and necrotic cells.
Acridine Orange是一种可穿透细胞的核酸选择性荧光染料，Acridine Orange可与DNA或RNA结合时产生荧光，与双链DNA结合时产生绿色荧光（激发光为488nm；发射光为530nm绿色荧光）。Acridine Orange与细胞中DNA和RNA结合量存在差别，Acridine Orange与单链DNA或RNA结合量结合量多发桔黄色或桔红色荧光（激发光为488nm；发射光为640nm）。因此，常被用于鉴别正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。
本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1、制备Acridine Orange染色液
（1）Acridine Orange染料储存液: 使用DMSO将Acridine Orange溶解成1mg/ml的储存液。注意:未使用的储存液建议分装后于-4℃或-20℃避光保存（在氮气下储存），避免反复冻融。
（2）Acridine Orange染料工作液制备:用合适的缓冲液(如:无血清培养基，HBSS或PBS)稀释储存液，配制浓度为0.5-20μg/ml的Acridine Orange工作液。注意: 请根据实际情况调整工作液浓度，现用现配
2、细胞的DNA和RNA染色
(1) 收集细胞悬液，将约0.2ml/份的原始细胞悬液转移至2/5mL体积的小玻璃或塑料管中, 放置在冰上冷却；
(2) 缓慢加入0.4mL预冷的细胞透化液，将细胞置于冰上静置约15s；
(3) 缓慢加入1.2mL预冷的Acridine Orange工作液，冰上避光孵育2-15min；
(4) 使用流式细胞仪测量并记录细胞荧光，在488nm处激发，通过发射滤光片和分色镜区分绿色荧光（在530nm处测量）处的dsDNA和红色发光（优选在640nm以上测量）处的RNA，Acridine Orange结合ssDNA后的激发光/发射光波长为488/650nm。
3、细胞贴壁染色（冰上操作）
（1）在无菌盖玻片上培养贴壁细胞；
（2）从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中；
（3）从盖玻片的一角加入100μl染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞，冰上避光孵育2-15min；
（4）吸弃染料工作液，使用培养液清洗盖玻片2~3次，通过荧光显微镜进行观察。
4、检测
（1）可通过荧光显微镜，或是流式细胞仪检测Acridine Orange标记细胞情况（Ex: 488nm; Em: 530nm绿色荧光，640nm橙色荧光）。
注意事项：
（1）细胞如需固定后染色，建议使用70%乙醇进行固定，冰上固定≥2小时，固定后使用预冷的PBS漂洗1-2次，除去所有乙醇，而后按照上述步骤进行染色；
（2）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭；
（3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1] Hu P, Wang J, Qing Y, et al. FV-429 induces autophagy blockage and lysosome-dependent cell death of T-cell malignancies via lysosomal dysregulation. Cell Death Dis. 2021 Jan 13;12(1):80.
| Cas No. | 494-38-2 | SDF | |
| 别名 | 吖啶橙,NSC 194350 | ||
| 化学名 | N3,N3,N6,N6-tetramethyl-3,6-acridinediamine | ||
| Canonical SMILES | CN(C)C1=CC(N=C(C=C(N(C)C)C=C2)C2=C3)=C3C=C1 | ||
| 分子式 | C17H19N3 | 分子量 | 265.4 |
| 溶解度 | 0.3mg/mL in ethanol, 20mg/mL in DMSO, 2mg/mL in DMF | 储存条件 | Store at -20°C, protect from light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
||
| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 3.7679 mL | 18.8395 mL | 37.679 mL |
| 5 mM | 0.7536 mL | 3.7679 mL | 7.5358 mL |
| 10 mM | 0.3768 mL | 1.8839 mL | 3.7679 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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