3X HA Tag
目录号 : GC722803X HA Tag是一种生物活性肽，由9个氨基酸残基（YPYDVPDYA）重复3次构成。
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
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3X HA Tag is a bioactive peptide composed of the 9-amino-acid sequence YPYDVPDYA repeated 3 times[1]. HA Tag is derived from the hemagglutinin (HA) surface glycoprotein of human influenza virus, featuring high specificity and hydrophilicity. It enhances the possibility of antigen - antibody reactions on the surface of fusion proteins[2]. With more repeats, 3X HA Tag has stronger antigenicity and higher binding affinity for anti - HA antibodies, ensuring higher detection sensitivity, especially for low - abundance proteins[3]. It's widely used in protein affinity purification experients to elute HA-tagged proteins[4][5].
References:
[1] Schneider, B. L., Seufert, W., Steiner, B., Yang, Q. H., & Futcher, A. B. (1995). Use of polymerase chain reaction epitope tagging for protein tagging in Saccharomyces cerevisiae. Yeast (Chichester, England), 11(13), 1265–1274.
[2] Zhao, X., Li, G., & Liang, S. (2013). Several affinity tags commonly used in chromatographic purification. Journal of analytical methods in chemistry, 2013, 581093.
[3] Ensinck, M., De Keersmaecker, L., Heylen, L., Ramalho, A. S., Gijsbers, R., Farré, R., De Boeck, K., Christ, F., Debyser, Z., & Carlon, M. S. (2020). Phenotyping of Rare CFTR Mutations Reveals Distinct Trafficking and Functional Defects. Cells, 9(3), 754.
[4] Lim, J., Iftner, T., & Simon, C. (2021). Native Isolation of 3×HA-Tagged Protein Complexes to Characterize Protein-Protein Interactions. Current protocols, 1(2), e29.
[5] Tanaka, T., Umemori, T., Endo, S., Muramatsu, S., Kanemaki, M., Kamimura, Y., Obuse, C., & Araki, H. (2011). Sld7, an Sld3-associated protein required for efficient chromosomal DNA replication in budding yeast. The EMBO journal, 30(10), 2019–2030.
3X HA Tag是一种生物活性肽，由9个氨基酸残基（YPYDVPDYA）重复3次构成[1]。HA Tag来源于人类流感病毒的血凝素（HA）表面糖蛋白，具有高度的特异性和亲水性，能够增加融合蛋白表面抗原抗体反应的可能性[2]。3X HA Tag由于重复次数更多，抗原性更强，与抗HA抗体的结合亲和力更高，因此在检测时灵敏度更高，尤其适用于低表达蛋白的检测[3]。它广泛应用于蛋白广泛应用于蛋白亲和纯化实验中以洗脱HA标记的蛋白[4][5]。
3xHA标签蛋白纯化方案
A：细胞收集和裂解
1. 收集表达Sld7-3Flag-HA的YTT4细胞（7×10⁷cells/ml, 2.5L）。
2. 用蒸馏水清洗细胞一次。
3. 使用砂浆研磨机在液氮下破坏细胞。
4. 将细胞裂解液悬浮在5ml裂解缓冲液A（50mM HEPES-KOH（pH 7.5），300mM氯化钾，0.5%吐温20, 0.05% NP40, 10%甘油，1×Complete, 1%蛋白酶抑制剂混合物，50mM氟化钠，2mM β-甘油磷酸盐，0.4mM Na3VO4, 0.5mM Na4P2O7,1mM PMSF)中。
5. 在4°C下，12,000rpm离心15分钟，澄清裂解物。
B：蛋白提取和吸附
6. 将蛋白提取物吸附到1ml Sepharose 4B中，在4°C下吸附30分钟。
7. 将混合物与1ml anti-Flag M2亲和凝胶混合后与含有5mg/ml BSA的裂解缓冲液A预孵育，在4℃下孵育2.5小时。
C：用Flag Peptide洗涤和洗脱
8. 用含有5mg/ml BSA的ml裂解缓冲液A洗涤三次。
9. 用500μl的Flag洗脱缓冲液（裂解缓冲液A含有150mg/ml的3× Flag肽）在4℃下孵育1小时，洗脱结合蛋白2次。
D: Anti-HA Matrix进一步纯化
10. 洗脱液与120μl Anti-HA Matrix 混合后用anti-Flag M2亲和凝胶预处理，4℃孵育2.5小时。
11. 用1ml含5mg/ml BSA的缓冲液A洗涤3次，1ml含0.1mg/ml BSA的缓冲液A洗涤1次，1ml缓冲液A洗涤1次。
12. 用100μl HA洗脱缓冲液（裂解缓冲液A含1.5mg/ml 3× HA肽）在37℃下孵育30分钟，洗脱结合蛋白两次。
E：蛋白沉淀和分析
13. 加入三氯乙酸沉淀蛋白，然后离心。
14. 沉淀在50μl的1× SDS上样缓冲液中煮沸3分钟。
15. 用SDS -聚丙烯酰胺凝胶分离蛋白质，用SilverQuest染色。
16. 切胶获取蛋白，用胰蛋白酶消化，并用质谱法分析。
本方案仅供参考，请根据您的具体需要进行修改。
References:
[1] Tanaka, T., Umemori, T., Endo, S., Muramatsu, S., Kanemaki, M., Kamimura, Y., Obuse, C., & Araki, H. (2011). Sld7, an Sld3-associated protein required for efficient chromosomal DNA replication in budding yeast. The EMBO journal, 30(10), 2019–2030.
| Cas No. | SDF | ||
| 分子式 | C205H272N38O67S | 分子量 | 4372.63 |
| 溶解度 | DMSO : 100 mg/mL (22.87 mM; Need ultrasonic; Hygroscopic DMSO has a significant impact on the solubility of product, please use newly opened DMSO) | 储存条件 | Store at 2-8°C,Sealed storage, away from moisture and light |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
 |
1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 0.2287 mL | 1.1435 mL | 2.287 mL |
| 5 mM | 0.0457 mL | 0.2287 mL | 0.4574 mL |
| 10 mM | 0.0229 mL | 0.1143 mL | 0.2287 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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- SDS (Safety Data Sheet)
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