DCFH2-DA (2',7'-Dichlorofluorescein diacetate)
(Synonyms: 双氯荧光黄乙酸乙酯,DCFH2-DA) 目录号 : GC42079
DCFH2-DA (2',7'-Dichlorofluorescein diacetate)是一种具有细胞膜渗透性的通用氧化应激指示剂，可用于检测活性氧（ROS）、一氧化氮（·NO）及评估总体氧化应激水平，广泛应用于细胞氧化还原过程的监测。
Cas No.:2044-85-1
Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.
DCFH2-DA (2',7'-Dichlorofluorescein diacetate) is a cell-membrane-permeable universal oxidative stress indicator. This reagent can be used to detect reactive oxygen species (ROS), nitric oxide (NO), and to assess the overall oxidative stress level[1]. DCFH₂-DA is widely used for monitoring cellular redox processes. DCFH₂-DA itself is non-fluorescent. After entering the cells, DCFH₂-DA is hydrolyzed by cellular esterases to generate 2',7'-dichlorodihydrofluorescein (DCFH), which is then rapidly oxidized to the highly fluorescent product 2',7'-dichlorofluorescein (DCF). The fluorescence signal can be detected by fluorescence spectroscopy with an excitation wavelength of 492nm and an emission wavelength of 515nm[2].
References:
[1] Hans C, Saini R, Sachdeva MUS, et al. 2',7'-Dichlorofluorescein (DCF) or 2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFH2-DA) to measure reactive oxygen species in erythrocytes. Biomed Pharmacother. 2021 Jun;138:111512.
[2] Cowley PM, Nair DR, DeRuisseau LR, et al. Oxidant production and SOD1 protein expression in single skeletal myofibers from Down syndrome mice. Redox Biol. 2017 Oct;13:421-425.
DCFH2-DA (2',7'-Dichlorofluorescein diacetate)是一种具有细胞膜渗透性的通用氧化应激指示剂，可用于检测活性氧（ROS）、一氧化氮（·NO）及评估总体氧化应激水平，广泛应用于细胞氧化还原过程的监测[1]。DCFH2-DA本身无荧光，进入细胞后会被细胞酯酶水解生成2',7'-二氯二氢荧光素（DCFH），随后迅速氧化为强荧光产物2',7'-二氯荧光素（DCF）。DCF荧光信号可通过荧光光谱检测，激发光波长为488nm，发射光波长为525nm[2]。
细胞染色：
本方案仅提供一个指导，请根据您的具体需要进行修改。
1. 制备染色液
(1)配置储存液:使用DMSO溶解2',7'-Dichlorofluorescein diacetate（DCFH2-DA），配置浓度为1-10mM的储存液。储存液分装后在-20℃避光保存，避免反复冻融。
(2)配置工作液:用合适的缓冲液(如:无血清培养基或PBS)稀释储存液，配制浓度为1-100μM的工作液。请根据实际情况调整工作液浓度，现用现配。
2.细胞悬浮染色
(1)悬浮细胞：经4°C、1000g离心3-5分钟，弃去上清液，用PBS清洗两次，每次5分钟。
(2)贴壁细胞：使用PBS清洗两次，加入胰酶消化细胞，消化完成后经1000g离心3-5min。
(3)加入DCFH2-DA工作溶液重悬细胞，室温避光孵育5-30分钟。不同细胞最佳孵育时间不同，请根据具体实验需求自行摸索。
(4)孵育结束后，经1000g离心5分钟，去除上清液，加入PBS清洗2-3次，每次5分钟。
(5)用预温的无血清细胞培养基或PBS重悬细胞，通过荧光显微镜或流式细胞术观察。
3.细胞贴壁染色
(1)在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。
(2)从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中。
(3)从盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
(4) 室温避光孵育5-30分钟。不同细胞最佳孵育时间不同，请根据具体实验需求自行摸索。
(5)孵育结束后吸弃染料工作液，使用预温的培养液清洗盖玻片2~3次。
4.显微镜检测：DCFH2-DA的最大吸收/发射波长为492/515nm。
注意事项：
(1)荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
(2)为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
References:
[1] Zhao W, Ma G, Chen X. Lipopolysaccharide induced LOX-1 expression via TLR4/MyD88/ROS activated p38MAPK-NF-?B pathway. Vascul Pharmacol. 2014 Dec;63(3):162-72.
| Cas No. | 2044-85-1 | SDF | |
| 别名 | 双氯荧光黄乙酸乙酯,DCFH2-DA | ||
| Canonical SMILES | CC(OC1=C(Cl)C=C(C2(C(C=CC=C3)=C3C(O2)=O)C(C=C(Cl)C(OC(C)=O)=C4)=C4O5)C5=C1)=O | ||
| 分子式 | C24H14Cl2O7 | 分子量 | 485.3 |
| 溶解度 | 0.1 M Na2CO3: 5 mg/ml,DMF: 25 mg/ml,DMSO: 33 mg/ml,Ethanol: 25 mg/ml,PBS (pH 7.2): 20 µ g/ml | 储存条件 | Store at 2-8°C |
| General tips | 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液；一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。 储备液的保存方式和期限：-80°C 储存时，请在 6 个月内使用，-20°C 储存时，请在 1 个月内使用。 为了提高溶解度，请将管子加热至37℃，然后在超声波浴中震荡一段时间。 |
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| Shipping Condition | 评估样品解决方案：配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸：配备RT，或根据请求配备蓝冰。 | ||
| 制备储备液 | |||
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1 mg | 5 mg | 10 mg |
| 1 mM | 2.0606 mL | 10.3029 mL | 20.6058 mL |
| 5 mM | 0.4121 mL | 2.0606 mL | 4.1212 mL |
| 10 mM | 0.2061 mL | 1.0303 mL | 2.0606 mL |
| 第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量） | ||||||||||
| 给药剂量 | mg/kg |  |
动物平均体重 | g | |
每只动物给药体积 | ul | |
动物数量 | 只 |
| 第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶于水的药物；不同批次药物配方比例不同，请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方） | ||||||||||
| % DMSO % % Tween 80 % saline | ||||||||||
| 计算重置 | ||||||||||
计算结果:
工作液浓度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL，
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL saline，混匀澄清。
1. 首先保证母液是澄清的；
2.
一定要按照顺序依次将溶剂加入，进行下一步操作之前必须保证上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用涡旋、超声或水浴加热等物理方法助溶。
3. 以上所有助溶剂都可在 GlpBio 网站选购。
Quality Control & SDS
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