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bis-ANS (potassium salt)

(Synonyms: 4,4'-二苯胺基-1,1'-联萘-5,5'-二磺酸二钾盐,4,4'-Dianilino-1,1'-binaphthyl-5,5'-disulfonic Acid) 目录号 : GC42942

一种高亲和力非共价外源荧光染料

bis-ANS (potassium salt) Chemical Structure

Cas No.:65664-81-5

规格 价格 库存 购买数量
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Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.

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实验参考方法

本方案仅提供一个指导,根据您的具体需要进行修改。

1 制备bis-ANS染色液:

(1)配置染料储存液:将bis-ANS溶于DMSO中,配置浓度为5-50mM的储存液。储存液分装后在-20 °C避光保存。

(2)使用合适的缓冲液(:无血清培养基,HBSSPBS)稀释储存液,配制浓度为5-50μMbis-ANS工作液,使用0.22μm滤膜过滤除菌。

注意:请根据实际情况调整bis-ANS工作液浓度,现用现配。

2、细胞悬浮染色(6 孔板为例)

1)悬浮细胞经1000g离心3-5min。弃去上清液,使用PBS清洗两次,每次5分钟。

2)贴壁细胞使用PBS清洗两次,加入胰酶消化细胞,消化完成后经1000g离心3-5min

3)加入1mL染料工作液重悬细胞,室温避光孵育15-30分钟,不同细胞最佳培养时间不同。

4孵育结束后,经1000g离心5分钟,去除上清液,加入PBS清洗2-3,每次5分钟

5)使用无血清细胞培养基或PBS重悬细胞,通过荧光显微镜或流式细胞技术进行观察。

3、细胞贴壁染色

1)在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。

2)从培养基中移走盖玻片,吸出过量的培养基,加入PBS清洗1-2,并将盖玻片放在潮湿的环境中。

3)从盖玻片的一角加入100μL染料工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞,室温避光孵育15-30分钟。

4)吸弃染料工作液,使用PBS清洗盖玻片2~3,每次5分钟

4、bis-ANS检测蛋白表面疏水性变化

1)使用5-50μMbis-ANS工作液稀释蛋白,至蛋白终浓度为5-10μM。请根据具体实验需求选定合适的染料工作浓度。

(2)使用荧光分光光度计记录400-600 nm处的发射光谱,减去缓冲液中游离bis-ANS的荧光信号

5显微镜检测:使用光学显微镜或流式细胞仪对染色细胞进行检测,bis-ANS的最大激发光为390 nm。溶液中游离bis-ANS的最大发射光为523 nm,但与蛋白结合后发生蓝移,荧光强度增加,最大发射光转移至484-496 nm。

 

注意事项:

1)荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。

2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

产品描述

bis-ANS是一种用于分析蛋白质构象的高亲和力非共价外源荧光染料。[1]它与蛋白质的主要相互作用是通过其疏水的苯环和萘环。[2] bis-ANS具有390 nm的最大激发。[3]当在溶液中游离时,它具有523 nm的最大发射,但是当与蛋白质结合时,随着荧光强度的增加而经历蓝移;例如,当与肠脂肪酸结合蛋白(FAPB2)结合时,它具有484-496 nm的最大发射。bis-ANS已被用于标记急性脑切片中机械损伤的神经元。4它还能有效抑制微管装配。[5],[6]

Reference:
[1]. Hawe, A., Sutter, M., and Jiskoot, W. Extrinsic fluorescent dyes as tools for protein characterization. Pharm. Res. 25(7), 1487-1499 (2008).
[2]. Bothra, A., Bhattacharyya, A., Mukhopadhyay, C., et al. A fluorescence spectroscopic and molecular dynamics study of bis-ANS/protein interaction. J. Biomol. Struct. Dyn. 15(5), 959-966 (1998).
[3]. Pastukhov, A.V., and Ropson, I.J. Fluorescent dyes as probes to study lipid-binding proteins. Proteins 53(3), 607-615 (2003).
[4]. Mozes, E., Hunya, A., Toth, A., et al. A novel application of the fluorescent dye bis-ANS for labeling neurons in acute brain slices. Brain Res. Bull. 86(3-4), 217-221 (2011).
[5]. Horowitz, P., Prasad, V., and Luduena, R.F. Bis(1,8-anilinonaphthalenesulfonate). A novel and potent inhibitor of microtubule assembly. J. Biol. Chem. 259(23), 14647-14650 (1984).
[6]. Mazumdar, M., Parrack, P.K., Mukhupadbhyay, K., et al. Bis-ANS as a specific inhibitor for microtubule-associated protein induced assembly of tubulin. Biochemistry 31(28), 6470-6474 (1992).

Chemical Properties

Cas No. 65664-81-5 SDF
别名 4,4'-二苯胺基-1,1'-联萘-5,5'-二磺酸二钾盐,4,4'-Dianilino-1,1'-binaphthyl-5,5'-disulfonic Acid
化学名 4,4'-bis(phenylamino)-[1,1'-binaphthalene]-5,5'-disulfonic acid, dipotassium salt
Canonical SMILES [O-]S(C1=CC=CC2=C1C(NC3=CC=CC=C3)=CC=C2C4=C(C=CC=C5S([O-])(=O)=O)C5=C(NC6=CC=CC=C6)C=C4)(=O)=O.[K+].[K+]
分子式 C32H22N2O6S2•2K 分子量 672.9
溶解度 30 mg/ml in DMSO, 30 mg/ml in DMF, Slightly soluble in Ethanol 储存条件 Store at -20°C, protect from light
General tips 请根据产品在不同溶剂中的溶解度选择合适的溶剂配制储备液;一旦配成溶液,请分装保存,避免反复冻融造成的产品失效。
储备液的保存方式和期限:-80°C 储存时,请在 6 个月内使用,-20°C 储存时,请在 1 个月内使用。
为了提高溶解度,请将管子加热至37℃,然后在超声波浴中震荡一段时间。
Shipping Condition 评估样品解决方案:配备蓝冰进行发货。所有其他可用尺寸:配备RT,或根据请求配备蓝冰。

溶解性数据

制备储备液
1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.4861 mL 7.4305 mL 14.861 mL
5 mM 0.2972 mL 1.4861 mL 2.9722 mL
10 mM 0.1486 mL 0.7431 mL 1.4861 mL
  • 摩尔浓度计算器

  • 稀释计算器

  • 分子量计算器

质量
=
浓度
x
体积
x
分子量
 
 
 
*在配置溶液时,请务必参考产品标签上、MSDS / COA(可在Glpbio的产品页面获得)批次特异的分子量使用本工具。

计算

动物体内配方计算器 (澄清溶液)

第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
给药剂量 mg/kg 动物平均体重 g 每只动物给药体积 ul 动物数量
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶于水的药物;不同批次药物配方比例不同,请联系GLPBIO为您提供正确的澄清溶液配方)
% DMSO % % Tween 80 % saline
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